5、Co-IP实验对抗体有什么要求? 若是自身蛋白抗体,抗体需要达到IP级别,并且需要测试其效价,商业化的标签抗体也需要达到IP级别。 6、Co-IP实验如何避免出现假阳性? (1)若抗体浓度高,则降低抗体浓度;(2)若抗体特异性不好,则更换抗体; (3)若蛋白丰度非常高,则可以加大洗涤次数。 7、Co-IP中的ProteinA/G琼脂...
当然非内源性可以适当降低要求,没有这么苛刻。 (2)适合以及适量的抗体。IP 之前,一定要明确你的目标蛋白并且确认目标蛋白的抗体是否是 IP 级别的,否则实验很难进行。如果是鉴定带标签的目标蛋白的互作,推荐使用 sigma 的 flag 抗体,直接耦合 beads,使用非常方便,效价高,最重要的是避免了与重轻链大小相似的蛋白...
5.选择适合实验条件的抗体：不同实验方法对蛋白的处理方式不同，对抗体所能识别的抗原表位和效价也有着不一样的要求。因此，在选择抗体时，需要考虑实验条件（如提取和处理蛋白样本时是否会变性、空间构象的改变等）以及抗体是否能在这些条件下有效识别目标蛋白。二、其他消除杂带干扰的策略 1.优化实验条件：可以通过...
特异性 通常很好,但有时会有非特异性相互作用 极佳,但有时会有交叉反应 极佳(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 优点 亲和力高(由于抗体可以与目的蛋白的多个抗原决定簇相互作用) 特异性好,且可以无限量供应 特异性好,亲和力高(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)...
方案3:使用HRP直标一抗作为WB检测抗体 使用HRP直标一抗作为WB检测抗体,可以不再需要二抗,因此不会出现二抗对IP产物中捕获抗体轻/重链的识别,不会出现“杂带”。 方案4:使用抗体偶联beads进行IP捕获 这里需要根据使用的抗体类型进行区分。如果是传统抗体(来源于鼠/兔等)偶联beads,则还是需要根据IP捕获抗体和WB检测...
除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体Y）对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X(抗体Y)。在某些CO-IP实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行蛋白X和蛋白Y的WB检测，该对照组称为output组。免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—...
充足的样本量是免疫共沉淀的关键因素之一。通常需要5-10 mg/ml的正常蛋白量，以确保内源性相互作用的检测。为了防止实验失败后样本不足，建议准备更多的样本，确保能进行至少1-2次WB检测。而对于非内源性蛋白，要求相对宽松一些。选择适合且适量的抗体对于免疫共沉淀至关重要。目标蛋白的抗体需要为IP级别...
例如，IP技术对抗体的特异性和亲和力要求较高，如果抗体的特异性不够好，可能会出现假阳性结果。此外，IP技术只能检测已知的蛋白质相互作用，对于未知的蛋白质相互作用无法发现。二、CO-IP-MS CO-IP-MS（co-immunoprecipitation coupled with mass spectrometry）是一种结合IP技术和质谱分析技术的蛋白质相互作用研究技术...
内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。