Co-IP是研究蛋白相互作用的“金标准”,利用特异性抗体捕获抗原,进一步捕获与目标抗原相互作用的蛋白。这个过程类似于钓鱼,抗体是鱼竿和鱼线,诱饵蛋白是鱼饵,而猎物蛋白就是我们要钓的鱼。 实验流程 📝 将抗体固定在固相介质(如琼脂糖珠或磁珠)上,形成beads; 将固定好的抗体与样品共孵育; 通过洗涤,去除未结合或非...
免疫共沉淀(Co-IP)实验用于研究蛋白质相互作用，确保实验质量至关重要。以下关键注意事项需重点关注：1. 避免长时间置于磁场，以防磁珠聚团，抗体结合后操作应轻柔，以防脱落。2. 使用前确认抗体所属亚型与Protein A/G亲和度，若亲和度不佳，可通过延长孵育时间、调整缓冲液pH值至8-9及降低离子强度至...
同时可以结合Co-IP反向验证进一步排除假阳性。若抗体浓度过高,则降低抗体浓度;若抗体特异性不好,则更换抗体。 8、质谱结果几百个怎么分析可能的互作蛋白? 答:如果蛋白较多,建议先做功能注释,从中选择与研究方向功能相关的蛋白;在这些蛋白通过质谱数据(得分)进一步排序,确认2-3个进行验证。 9、请问是不是在不知互作...
一、原理要掌握 Co-IP:是研究蛋白相互作用的传统“金标准”,是免疫沉淀技术的延伸,是利用特异性抗体捕获抗原,并进一步捕获与目标抗原相互作用的蛋白,然后再通过固相介质(如磁珠或琼脂糖珠)将目标抗原与其相互作用的蛋白富集下来。这其实与钓鱼很像,我们可以把固相介质想象为钓鱼者,抗体就是鱼竿鱼线,诱饵蛋白就是鱼饵,...
3.IP组免疫沉淀的融合蛋白的标签与空载对照的标签蛋白一定要一致吗? 不一定,上面图3中IP组免疫沉淀的融合蛋白,其标签蛋白与对照空载标签蛋白是一致的(图5中蓝色框所示,其中Control是FLAG的空载对照),很多文献里面确实也都是这样做的,但是也存在不一致的情况,比如上面的图1,IP组的免疫沉淀融合蛋白的标签与空载对照...
又便宜又好用的那种 今天也是努力IP/Co-IP的一天。 图1. 经典IP/co-IP实验步骤 研究好了实验步骤,设置好了对照,避开了容易出问题的大坑;准备好了各种试剂:裂解溶液,各种buffer,抗体,磁珠... 吭哧吭哧按部就班做完,理想很丰满,现实很骨感。 上路新手:没有条带,拉不下来蛋白,要逐个步骤的分析,到底蛋白从哪里...
一次周期为4天的co-IP 这tmd是第6次重复又没做出来我疯了哦耶咱就是说真的做不出来重复就是浪费我的生命啊啊啊啊啊啊啊啊啊吧啊啊啊吧啊 #读博日记#
求做Co-IP好用的myc 或GFP抗体，或者偶联的beads。在烟草瞬时表达，myc的抗体做IP特异性是个不是比...
通过免疫共沉淀(co-IP)、pull-down、交联(使用交联剂)、标签转移和far western blot分析等方法表征蛋白-蛋白互作对,理解蛋白功能和细胞的生理变化的至关重要。这些方法中,免疫(共)沉淀(IP/co-IP)又是最最常用的方法。 作为实验室的日常标配之一,你对TA的熟稔程度又如何?和PCR,WB一样吗?