以下是一般性的Co-IP方法描述: 1.样本准备: -收集细胞或组织样本,并使用适当的缓冲液(如RIPA缓冲液)裂解细胞膜并释放蛋白质。 2.预处理样品: -加入蛋白酶抑制剂和其他必要的添加剂,以防止蛋白质降解。 3.免疫沉淀: -添加抗体(已知结合目标蛋白质的抗体)至样品中,进行共免疫沉淀。此过程中,抗体将与目标蛋白...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种以抗体和抗原之间的特异免疫反应为基础,研究蛋白质与蛋白质间相互作用的经典方法。其基本原理是在细胞裂解液中加入抗原特异性的抗体,抗体、抗原、以及与抗原具有相互作用的蛋白质通过抗原与抗体之间免疫沉淀反应将形成免疫复合物,经过纯化,洗脱,收集免疫复合物,SDS-PAGE电...
首先证实了ANXA1可以被SUMO化,通过Co-IP证实ANXA1能够与SUMO2结合强烈,与SUMO3结合适度,与SUMO1结合微弱,进一步发现SUMO化的ANXA1能够促进NF-κB信号通路重要调节分子IKKα的降解从而抑制NF-κB信号通路,进而抑制IL-1b, IL-6, TNF-α等炎症因子的分泌,从而改善脑缺血后小胶质细胞的过度炎症反应,为脑缺血的治疗提...
2.大多数免疫沉淀实验需在 4℃下进行，同时依据实验目的提前将蛋白酶抑制剂和或磷酸酶抑制剂添加到裂解液中 3.IP/Co-IP 实验的成功与否与蛋白样品质量（抗原质量）息息相关，选择合适的蛋白制备方案，提高蛋白样品质量是实验的成功必要条件。
一、CO-IP方法 CO-IP方法是一种通过特异性抗体将目标蛋白与其相互作用的蛋白一起沉淀下来的技术。其基本步骤包括：1）细胞或组织的裂解，释放蛋白质；2）与目标蛋白特异性抗体结合，形成免疫复合物；3）将免疫复合物与蛋白A/G磁珠等亲和剂结合，使其沉淀下来；4）洗涤去除非特异性结合的蛋白；5）蛋白质的分离和...
蛋白相互作用在信号通路研究中较为常见,经典的方法有:CO-IP、GST-pulldown、酵母双杂交系统。相较于酵母双杂交、pull down等方法,CO-IP之所以能成为蛋白互作的经典方法,是因为--它捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内,保存了互作蛋白及复合体的“内源”状态。 一、注意事项: (1)细胞裂解采用温和的裂解条...
此方法的优点在于所得的目的蛋白复合物具有生理活性,但洗脱效果较低。 步骤1:若使用Flag磁珠,将含有0.2-1 mg/mL Poly Flag多肽的TBS缓冲液加入洗涤后的产物中,缓冲液体积为磁珠使用量的5倍。4℃摇床孵育洗脱2-6小时(为了提高洗脱效率,可延长孵育时间或重复洗脱)。
CO-IP是一种利用抗体与目标蛋白质特异性结合的原理,将目标蛋白质与其相互作用的蛋白质一同沉淀下来的方法。具体步骤如下: 1 .细胞裂解:将目标蛋白质所在的细胞裂解,释放出细胞内的蛋白质。 2.抗体结合:将特异性抗体与目标蛋白质结合,形成抗原-抗体复合物。
5年免疫共沉淀Co-IP经验总结 (word版) 一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的 - 章鱼哥的医学科研于20241025发布在抖音,已经收获了
CO-IP是用于检测或探究蛋白与蛋白之间相互作用的实验,属于IP实验的扩展,在样品溶液中,捕获和纯化通过天然相互作用及靶标结合的其他大分子蛋白,基于抗原抗体的特异性免疫结合,以饵蛋白为诱饵蛋白,通过饵蛋白抗体捕获,磁珠吸附结合,进而将饵蛋白结合的互作蛋白捕获得到,纯化定量定性分析。 实验操作步骤: 1.样本准备 组织...