为了进一步证实TF/组蛋白修饰与靶基因的结合状态,需要通过不同的技术进行验证。ChIP-qPCR因其体内富集(相比体外实验)能够更真实地反映结合状态的特性,被众多老师青睐。 目前ChIP有两种定量方式,分别为“双△CT法”以及“双标准曲线法”。其中“双标准曲线法”每次实验都必须对目的基因和看家基因做两组标准曲线,并且如...
如果你想采取一种无偏差的方法，并需要确定基因组中转录因子或组蛋白修饰的所有位点，NGS测序更适合一些。
但有一点需要注意,有些靶蛋白的ChIP实验是不适合采用GAPDH的基因来作为靶蛋白抗体的阳性引物对照的,因为异染色质区域的组蛋白修饰类型(例如H3K9me3或H3K27me3等修饰)不会发生在GAPDH基因上,GAPDH是管家基因,一直高表达,一般不会发生H3K9me3或H3K27me3等抑制基因表达的修饰类型。 这时,如果一定要做阳性对照,还可以...
ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段;qPCR技术使用SYBR荧光染料,非特异性的掺入DNA双链,发射荧光,保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一,灵敏,快速,高重复地定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的结合。
ChIP-qPCR完美结合了ChIP技术和实时定量PCR技术。ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段;qPCR技术使用SYBR荧光染料,非特异性的掺入DNA双链,发射荧光,保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一,灵敏,快速,高重复地定量生物样品中特定转录因子/...
许多老师在做完ChIP-seq分析后,通常会找到感兴趣的TF/组蛋白修饰的1个或多个靶基因。为了进一步证实TF/组蛋白修饰与靶基因的结合状态,需要通过不同的技术进行验证。ChIP-qPCR因其体内富集(相比体外实验)能够更真实地反映结合状态的特性,被众多老师青睐。
ChIP-Qpcr/PCR技术采用特定抗体来富集存在组蛋白修饰或转录调控具有直接作用的DNA 片 段。通过选择自己感兴趣的目的基因,设计特异性的引物,对特异性抗体(并设置相应的阳性对照和 阴性对照和Input)免疫共沉淀后纯化出的DNA片段进行PCR或qPCR进行验证,高重复地半定量或定 ...
qPCR在关注特定基因和潜在调控区域的研究中具有成本低、实验限制少的优势,可应用于发育生物学,肿瘤机制研究以及组蛋白修饰对基因表达的影响等。但实现CUT&Tag-qPCR也并非易事,因为CUT&Tag的技术路线与ChIP有所不同,在ChIP实验中,被抗体特异性抓取的片段一般是目的基因片段,因此可以直接进行qPCR检测。而在传统的CUT&...
ChIP-Qpcr/PCR技术采用特定抗体来富集存在组蛋白修饰或转录调控具有直接作用的DNA片段。通过选择自己感兴趣的目的基因,设计特异性的引物,对特异性抗体(并设置相应的阳性对照和阴性对照和Input)免疫共沉淀后纯化出的DNA片段进行PCR或qPCR进行验证,高重复地半定量或定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的...
ChIP-Seq技术将ChIP与高通量测序相结合，实现了全基因组范围内特定蛋白的DNA结合位点的高效和准确筛选与鉴定。这种技术通过使用特定的组蛋白修饰特异性抗体富集与其结合的DNA片段，并进行纯化和文库构建，然后进行高通量测序，通过与参考基因组的精确比对，研究人员可以获取全基因组范围内某种修饰类型的特定组...