(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一种适用于在体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法。这项技术能够帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰或转录因子结合。目前也是众多学者研究蛋白-DNA互作的主流技术。 许多老师在做完ChIP-seq分析后,通常会找到感兴趣的TF/组蛋白修饰的1个或多个靶基因。
NativeChIP方法通常仅适用于与DNA结合非常紧密的蛋白质，例如组蛋白。
但有一点需要注意,有些靶蛋白的ChIP实验是不适合采用GAPDH的基因来作为靶蛋白抗体的阳性引物对照的,因为异染色质区域的组蛋白修饰类型(例如H3K9me3或H3K27me3等修饰)不会发生在GAPDH基因上,GAPDH是管家基因,一直高表达,一般不会发生H3K9me3或H3K27me3等抑制基因表达的修饰类型。 这时,如果一定要做阳性对照,还可以...
ChIP-Qpcr/PCR技术采用特定抗体来富集存在组蛋白修饰或转录调控具有直接作用的DNA 片 段。通过选择自己感兴趣的目的基因,设计特异性的引物,对特异性抗体(并设置相应的阳性对照和 阴性对照和Input)免疫共沉淀后纯化出的DNA片段进行PCR或qPCR进行验证,高重复地半定量或定 ...
ChIP-qPCR完美结合了ChIP技术和实时定量PCR技术。ChIP技术利用抗体特异性富集与特定转录因子/组蛋白修饰结合的DNA片段;qPCR技术使用SYBR荧光染料,非特异性的掺入DNA双链,发射荧光,保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,最后利用Ct值进行定量分析。ChIP-qPCR能够专一,灵敏,快速,高重复地定量生物样品中特定转录因子/...
CUT&Tag Pro试剂盒(Vazyme #TD904)在不同细胞投入量的293细胞中对组蛋白H3K4me3体系进行了CUT&Tag-qPCR实验,本试剂盒可兼容100 - 100,000细胞,在低细胞投入量下仍有良好表现。对于不同丰度的靶点我们也对多个目的基因设计了引物进行检测,相较于阴性对照IgG,实验组中目的基因均有显著富集。
许多老师在做完ChIP-seq分析后,通常会找到感兴趣的TF/组蛋白修饰的1个或多个靶基因。为了进一步证实TF/组蛋白修饰与靶基因的结合状态,需要通过不同的技术进行验证。ChIP-qPCR因其体内富集(相比体外实验)能够更真实地反映结合状态的特性,被众多老师青睐。
ChIP实验的流程大致可以分为以下几个步骤：1. **细胞处理**：使用甲醛固定细胞，以稳定蛋白-DNA复合体的结合状态。2. **细胞破碎**：通过超声波等方法破碎细胞，随机剪切染色质，形成短片段。3. **抗体结合**：加入特异性抗体，与染色质中的组蛋白结合，形成复合物。4. **沉淀分离**：加入蛋白A...
研究表观遗传修饰和染色质状态:ChIP-qPCR可以用于分析特定表观遗传修饰标记(如组蛋白修饰)与染色质区域的结合情况,揭示染色质状态和基因表达调控之间的关系。 验证转录因子结合位点的功能:通过ChIP-qPCR分析不同转录因子结合位点的富集程度,可以确定这些结合位点在基因调控中的功能...
ChIP-Qpcr/PCR技术采用特定抗体来富集存在组蛋白修饰或转录调控具有直接作用的DNA片段。通过选择自己感兴趣的目的基因,设计特异性的引物,对特异性抗体(并设置相应的阳性对照和阴性对照和Input)免疫共沉淀后纯化出的DNA片段进行PCR或qPCR进行验证,高重复地半定量或定量生物样品中特定转录因子/组蛋白修饰与已知基因启动子的...