技术方法:ChIP-seq、RNA-seq、RT-qPCR等 作者通过对小鼠体细胞重编程过程中进行转录组和ChIP-seq等测序分析,揭示了H3K27me3去甲基化酶JMJD3与KLF4在体细胞重编程中协同调控转录新机制。首先,JMJD3对重编程有2方面相反的作用;在机制上,JMJD3被KLF4特异性地招募至上皮和多能性基因位点,并辅助KLF4激活这些基因。进...
Step5:定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平 在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。...
Step5:定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平 在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。 两种常用的标准化 ChIP-qPCR 数据方法——Percent ...
在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。 两种常用的标准化 ChIP-qPCR 数据方法——Percent Input法和富集倍数法(Fold Enrichmen)。与in...
Step5:定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平 在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。
首先，我们使用 coverage() 函数创建一个包含我们的覆盖率分数的 RLElist 对象。forBigWig <- coverage...
Step5:定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平 在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。
Step5:定量DNA——测定目标蛋白质-DNA水平 在该步骤中,通过qPCR定量纯化的DNA产物,通过qPCR,您可以确定目标蛋白是否存在于特定位点。 ChIP的qPCR如何定量分析 ChIP-qPCR 数据需要针对可变性来源进行标准化,包括染色质数量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。
qPCR的结果最终以柱状图的形式展示出来,如下图例: 该图中,分别用IgG与CTCF抗体孵育,其中IgG抗体为阴性对照组,比较两者富集H19/gap in8/myo-ex DNA的能力,其中H19为阳性对照DNA, myo-ex为阴性对照DNA。 ChIP技术的应用 染色质免疫...
qPCR数据分析 在完成IP实验以及引物设计合成后,就可以进行qPCR实验啦。对每个样本(单个样本通常需要做3个技术重复)的Input、IP、IgG-DNA进行qPCR实验,统计每个复孔的CT值,随后利用2-△△CT法进行富集倍率的计算。 计算公式如下: ΔCt [normalized ChIP] = (Ct [ChIP] - (Ct [Input] -Log2 (Input Dilution ...