1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: ChIP常规PCR后的电泳示例图片 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下(Input百分比分析法): ChIP荧光定量PCR结果示例 3、DNA微阵列芯片...
ChIP实验仅仅是从样本中免疫沉淀富集特定目的DNA片段的过程,必须衔接下游实验才能得出有价值的结果。最常见的下游实验有四种: 1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录...
1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: ChIP下游常规PCR的电泳结果图 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平。 示例结果图片如下(Input百分比分析法): ChIP下游荧光定量PCR的结果图 3、DNA微...
图1 普通PCR 结果示意图 但是CST推荐使用实时PCR(qPCR)来分析CIP 结果,因为它是定量的。因此,此文主要讲的是ChIP-qPCR 的设置、计算与评价。 关于PCR 循环数 对于普通的PCR的单拷贝基因,我们建议使用大约30个PCR扩增循环; 对于多拷贝基因,如α卫星重复序列,我们建议使用大约20个PCR扩增循环,以确保PCR反应在线性扩...
图1 普通PCR 结果示意图 但是CST推荐使用实时PCR(qPCR)来分析CIP 结果,因为它是定量的。因此,此文主要讲的是ChIP-qPCR 的设置、计算与评价。 关于PCR 循环数 对于普通的PCR的单拷贝基因,我们建议使用大约30个PCR扩增循环; 对于多拷贝基因,如α卫星重复序列,我们建议使用大约20个PCR扩增循环,以确保PCR反应在线性扩...
与实时荧光定量 PCR 结合的 ChIP-qPCR,常用于检测蛋白质与特定位点的 DNA 是否有结合及结合的强度;与基因芯片结合的 ChIP-on-chip,广泛应用于特定靶标的高通量筛选;与高通量测序结合的 ChIP-seq,越来越多地被用于分析目标蛋白的全基因组结合情况。交联染色质免疫共沉淀 (Crosslinked ChIP, XChIP)需要交联固定,...
二、ChIP-qPCR实验及结果计算: 最后,我们就是用抗体做ChIP了。一些样本分为input组(看你自己选取百分之几的样作为input,这个要记住,后面要计算的。我们一般推荐1%-5%),剩下的样平均分为抗体组和lgG组。 那最后这三组DNA需要测浓度,一般来说,转录因子...
给大家show一张ChIP反应的PCR实验结果图: 在这个PCR反应中,最左边input,中间是阴性对照lgG,最右边是样本sample; input条带很弱,说明是假阴性结果,然而阴性对照lgG条带很明显,说明是假阳性结果。 本文转至:默克生命科学 ★ 诚聘兼职编辑:只要您认为自己的思维足够有逻辑、对研读最新Paper感兴趣,欢迎加入我们。
基因下方的条形图显示用于ChIP-qPCR分析的PCR产物的相对位置。在表达TAP标记的Nrd1菌株中使用IgG-琼脂糖珠进行ChIP分析。BY4741(无标签)菌株用作阴性对照。所指示基因的qPCR信号被定量并标准化到内部背景对照和input DNA。使用的引物对在(a)中指示。对WT和tho2Δ菌株转化pAG425GPD或pAG425GPD-NRD1(NRD1-OE)进行...