ChIP实验仅仅是从样本中免疫沉淀富集特定目的DNA片段的过程,必须衔接下游实验才能得出有价值的结果。最常见的下游实验有四种: 1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录...
最常见的下游实验有四种: 1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: ChIP下游常规PCR的电泳结果图 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平。 示例结果图片如下(Input百分比分析法): ChIP下游荧光定...
最常见的下游实验有四种: 1、标准PCR (ChIP-PCR) 用于定性检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下: ChIP常规PCR后的电泳示例图片 2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平 示例结果图片如下(Input百分比分析法): ChIP荧光定量PCR...
通过稀释不同比例的Input样本建立qPCR标准曲线,确定PCR反应效率。 ●富集效率的计算:ChIP-qPCR的富集效率通常以相对Input信号的富集比例来呈现。计算公式如:% of Input = (2^(-ΔΔCt)) × 100%,其中ΔΔCt为实验样本与Input样本的CT值之差。 ●结果分析:比较阳性对照、阴性对照及目的蛋白组的...
二、ChIP-qPCR实验及结果计算: 最后,我们就是用抗体做ChIP了。一些样本分为input组(看你自己选取百分之几的样作为input,这个要记住,后面要计算的。我们一般推荐1%-5%),剩下的样平均分为抗体组和lgG组。 那最后这三组DNA需要测浓度,一般来说,转录因...
疑难杂症3:样品输入对照组 PCR 反应中无产物拯救方法:①向 PCR 反应中添加更多 DNA 或增加扩增循环次数。②优化实验引物的 PCR 条件或设计小于 150 碱基对的引物扩增。③为获得最佳 ChIP 结果,每次 IP 添加 5-10 μg 染色质。 依照惯例,搬上我们的优秀案例 结合此结果图,阳性对照组条带清晰无杂带,阴性对照...
一般情况下,一次严格的ChIP 实验会设置阳性对照组、阴性对照组、目的蛋白组及input对照。我们通常看到普通PCR 的结果是图1这样的,这里研究了PPARγ与LPL (脂蛋白脂肪酶,lipoprotein lipase) 启动子区的结合情况。与染色质稳定结合的RNA poll-II 作为阳性对照,而ICAM-1是一个唯一定位于胞膜的蛋白,可以作为阴性对照。
一般情况下,一次严格的ChIP 实验会设置阳性对照组、阴性对照组、目的蛋白组及input对照。我们通常看到普通PCR 的结果是图1这样的,这里研究了PPARγ与LPL (脂蛋白脂肪酶,lipoprotein lipase) 启动子区的结合情况。与染色质稳定结合的RNA poll-II 作为阳性对照,而ICAM-1是一个唯一定位于胞膜的蛋白,可以作为阴性对照。
给大家show一张ChIP反应的PCR实验结果图: 在这个PCR反应中,最左边input,中间是阴性对照lgG,最右边是样本sample; input条带很弱,说明是假阴性结果,然而阴性对照lgG条带很明显,说明是假阳性结果。 本文转至:默克生命科学 ★ 诚聘兼职编辑:只要您认为自己的思维足够有逻辑、对研读最新Paper感兴趣,欢迎加入我们。
②优化实验引物的 PCR 条件或设计小于 150 碱基对的引物扩增。 ③为获得最佳 ChIP 结果,每次 IP 添加 5-10 μg 染色质。 依照惯例,搬上我们的优秀案例 结合此结果图,阳性对照组条带清晰无杂带,阴性对照组正常,表明ChIP实验结果可信,操作合格。Input对照组条带清晰可见,表明PCR扩增引物可用于该指标的检测。实验...