SuperScript™ Indirect cDNA Labeling System PCR Protocols cDNA Protocols 3´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends 5´ RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends cDNA Synthesis Directly from Cells Using SuperScript III CellsDirect cDNA Synthesis System First-Strand cDNA Syn...
查看实验 protocol RACE 实验 cDNA 末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是一种基于逆转录 PCR从低丰度的转录本中快速扩增 cDNA 的 5' 和 3’ 末端的有效方法。 需要得知 cDNA 两端序列信息时,或仅利用 poly(A) 尾无法获得全长 cDNA 时,可使用 RACE技术快速且特异性的获得 cDNA 全长序...
(1)在0.2ml的PCR管中加入以下反应体系:经检测合格的0.1ng-5μgRNA (RNA含量较低可以多管合在一起),1μl Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl),无RNase的水至12μl,轻微均匀,简单离心,65℃孵育5min。 (2)反应结束后至于冰上冷却2min;然后按顺序加入5×Reaction Buffer 4μl,RNA酶抑制剂(20U/μl)1μl...
Protocol: a highly sensitive rt-pcr method for detection and quantification of micrornas. Plant Methods, 3(1), 12-12.) 由于miRNA在20bp左右,无法根据其设计引物进行检测,可以先将其延长,也就是先加一个环状片段,这样就使得原来20bp左右的延伸为80bp左右了,然后就可以根据这个80bp片段设计引物。茎环法逆...
Reverse transcription is a critical step in this protocol and must be optimized to ensure efficient conversion of RNA into cDNA. 将cDNA用作PCR模板的第一步是进行反转录,从RNA合成cDNA。该过程需要反转录酶、dNTPs和引物来启动cDNA合成。然后可以将所得cDNA用作PCR反应中的模板,以扩增特定基因序列。反转录...
cDNA Synthesis for RT-PCR ProtocolGenomics, CancerBranch, Genetics
在传统的 RT-PCR 中,首先从细胞中分离出 RNA,这个程序非常耗时,会导致材料损失。使用 SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA 合成系统,可在单管中将细胞裂解,并以尽可能少的操作量从裂解液中获得 cDNA,且无样本损失。添加 DNase I,以便在第一链合...
图 茎环法逆转录原理 (图源:Varkonyi-Gasic, E. , Wu, R. , Wood, M. , Walton, E. F. , & Hellens, R. P. . (2007). Protocol: a highly sensitive rt-pcr method for detection and quantification of micrornas. Plant Methods, 3(1), 12-...
总RNA、反转录酶、RNA酶抑制剂、dNTP(10mM)、Oligd(T)、不含有RNA酶的灭菌水、5×反转录缓冲液、不含有RNA酶的0.2 mL PCR管、经过DEPC处理过的加样枪头(蓝色、黄色、白色)和1.5 mL离心管、加样器(1 mL、200 μL、100 μL、10 μL)、记号笔、口罩、一次...
First strand cDNA synthesis for RT-PCR (DNase treatment) 2008-12-1 1. DNase I treatment RNA in water or TE buffer 1–8μl (3μg?) RQ1 RNase-Free DNase 10X Reaction Buffer 1μl RQ1 RNase-Free DNase 1u/μg RNA (3u?) (promega, USA) Nuclease-free water to a final volume of 10...