共培养：将CD8+T细胞与肿瘤细胞、抗原呈递细胞等进行共培养，以观察和研究CD8+T细胞的杀伤功能、增殖能力等。共培养的比例、时间等条件需要根据实验目的进行调整。功能检测：通过流式细胞术、免疫荧光等方法检测CD8+T细胞的表面标记物（如CD8）、杀伤相关分子（如GZMB、IFN-gamma）以及增殖相关分子（如Ki67）等的表达...
在1:1的比例下,用CD3/CD28激活剂(能提供第一和第二信号)来刺激CD8+T细胞。然后,将这些细胞放入含有10% FBS、1%青链霉素双抗生素以及10ng/ml IL-2(只有激活后的T细胞才会表达IL-2受体)的DMEM/1640完全培养基中进行培养。细胞密度调整到1×106 cells/ml,每2-3天更换一次培养液。 Day 7 - 10: 再次激活CD8...
将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中(倾倒过程中流式管不要脱离磁力架),此细胞悬液中即包含 纯化的小鼠CD8+T细胞,500 g,离心5 min。离心后弃上清,收集细胞, 将细胞重悬于培养基中,即可用于后续扩增。 磁珠阴选 03 流式鉴定 CD8是CD8+T细胞重要的标记物,也是识别CD8+T细胞最可靠的标志。 04 培养注意事项 ●...
Day7-10:再次使用CD3/CD28激活剂刺激CD8+T细胞,并保持细胞浓度在1-1.5*10e6左右。 Day14:肿瘤细胞消化后终止洗涤,以5×105 cells/ml的浓度重悬于培养基中,并以1ml/孔接种于24孔培养板中,培养箱孵育过夜。 Day15:收集CD8+T细胞,计数细胞。对于所有共培养孔,上层放入小室(贴壁细胞可不加),将CD8+T细胞按1 :...
从PBMC或肿瘤组织中分离CD8+T细胞是体外或体外刺激后研究其表型和功能特性的重要要求。抗体介导的分离(如免疫磁珠分选试剂盒)是分离CD8+T细胞最常用的方法。理想的分离方法速度应较快,产量高,活性好,纯度高。IL-2应添加到培养基中,因为它对CD8/CTL的扩增、存活和功能至关重要...
1.一种培养富集人CD8+T细胞的细胞悬液的方法,包括以下步骤: 1)抽取人全血5~100ml并对其进行处理以获得分离的外周血单个核细胞; 2)对所述的分离的PBMCs进行分选,获得CD4+T细胞∶CD8+T细胞比率为1:1~1:5的T细胞悬液; 3)将所述的T细胞悬液在细胞培养板中在37°C、5%CO2和100%湿度条件下以AIM-V无血清细...
小鼠脾脏CD8+T细胞的磁珠分选 一、制备脾脏单细胞悬液 8周龄C57BL/6小鼠摘眼球放血,无菌分离脾脏,于70um滤网上研磨收集脾细胞,过滤、离心,再以RPMI-1640wan全培养液重悬。 二、磁珠标记 1. 细胞计数为8×107/mL。 2. 400×g离心4分钟,去除上清。
CD8+T细胞和肿瘤细胞的共培养过程包括：在CD8+T细胞激活后，按1:1的比例使用CD3/CD28激活剂刺激细胞，并将其培养在特定培养基中。调整细胞密度至1×106 cells/ml，每2-3天更换培养基。在第7-10天再次使用激活剂刺激细胞。第14天收集细胞，按比例添加至小室中，孵育18小时后收集上室和下室的细胞进行...
6. 与仅使用感兴趣的肽/抗原处理PBMCs并进行常规一周或两周的扩增相比,DC/T细胞共培养有何不同?使用PBMCs作为起始样本,我们已经成功地扩增了使用CMV激活的T细胞。然而,由此得到的抗原特异性T细胞的得率要低于DC/T细胞共培养。此外,DCs对naive T细胞的激活效果最佳,因此使用naive T细胞可获得更高比例的抗原特异性T细...
流式技术检测CD3、CD4、CD8 T细胞 方法参考 1.细胞复苏(针对上一次冻存的细胞) (1)提前打开37℃水浴锅,然后去-80℃冰箱从冻存盒取出冻存细胞,先放冰盒里。 (2)将冻存管插入水上漂,放入37℃水浴锅晃动2～3 min解冻。 擦干水渍后移入生物安全柜中,开酒精灯。 (3)15 mL离心管中提前加入7 mL培养基(...