1、CCK-8基本概念CCK-8: (Cell Counting Kit-8),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。 基本原理:CCK-8试剂中含有WST-8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞线…
预培养细胞:将培养板置于培养箱中(37℃,5% CO2)预培养12-24小时,使细胞达到指数期。 加入CCK-8:每孔加入10ul CCK-8试剂。 继续培养:将培养板返回培养箱内继续培养0.5-4小时。 检测吸光度:使用酶标仪检测450nm波长的吸光度(OD值)。实验重复3次,取平均值作为最终结果。 细胞毒性检测 制备细胞悬液:选取生长状...
(4)加入待测物之后培养的具体时间6~96h要看待测物质的性质和细胞的敏感性,例如6、12、24、48h。实验时可以选择不同作用时间下进行细胞毒性检测。 (5)如果待检测物质有氧化性或还原性,在加入CCK-8之前要更换新鲜培养基,以去掉待测物质的影响。如果影响比较小或者没有影响,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入...
6️⃣ 清洗细胞:处理结束后,用PBS清洗细胞。7️⃣ CCK-8准备:将CCK-8试剂在室温下解冻并离心。8️⃣ 加入CCK-8:每孔加入100 μL含10% CCK-8溶液的培养基。9️⃣ 孵育:避光孵育1小时,让CCK-8与细胞充分反应。🔟 检测:用酶标仪检测450 nm处的吸光值,这是反映活细胞数量的关键步骤。🌈 ...
检测吸光度前，需确保检测孔中无气泡。若存在少量气泡，可用针头蘸酒精轻轻戳破后再进行测定。CCK-8试剂对细胞的毒性极低，因此部分其他细胞实验（如中性红法或结晶紫法）可在CCK-8法检测完成后继续进行。若处理细胞的药物为小分子且无吸光性，则可直接在450nm波长下测定吸光度。然而，若药物为纳米颗粒等有色吸收...
CCK-8，即Cell Counting Kit-8，是细胞增殖与毒性检测中常用的方法。其核心成分是WST-8，一种2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。WST-8与MTT相似，但性能更优。在电子耦合试剂（即细胞活性、呼吸和能量代谢存在的情况下），WST-8能被NAD+氧化，进而生成水溶...
1. 细胞种板:首先,用胰酶消化细胞,然后加入10μL台盼蓝和10μL细胞悬液,充分混匀后用细胞计数板计数。将活细胞重悬,按照每孔200μL的体积加入48孔板中,细胞数量根据细胞系不同而有所差异,例如SNU-387和SK-Hep1使用4万细胞,PLC/PRF/5使用2万细胞。加细胞悬液时,先在15ml管中吹匀,然后吸取到1.5ml EP管...
细胞毒性试验方法:CCK-8法检测细胞增殖和毒性分析 CCK8全称为cell counting kit-8试剂,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。该试剂的关键组分是水溶性唑盐WST–8:化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐,它在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞线...
3️⃣ 培养细胞:将接种好的细胞放入37℃培养箱中培养,大约需要4小时让细胞贴壁。如果细胞不需要贴壁,可以省略此步骤。 4️⃣ 加入CCK-8试剂:每孔加入10ul CCK-8试剂。由于加入量较少,建议将枪头浸入培养液中加入,并在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者,可以直接配置含10%CCK-8的培养基(现用...