该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。 02.实验流程 1、将处理过的细胞胰酶消化后计数,接种1000个细胞至96孔板,每孔100μl培养基,将培养板置37℃,5%CO₂培养箱中培养0 h、24h、48h和72h;2、每孔加入10μlCCK-8溶液,用加了相...
01实验分组（每组建议3-6个复孔）实验组：药物或者基因过表达等处理细胞+CCK-8试剂（见下表黄色列）对照组：不加药物等的对照细胞+CCK-8试剂（见下表绿色列）空白组：不加细胞的空白培养基+CCK-8试剂（见下表蓝色列）PBS孔：灰色，防止液体过度蒸发排版参考：02实验方案 1.种板细胞数：细胞增殖实验：每孔加...
细胞毒性实验:每孔加入约5000～10000个细胞,100μl培养基(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。孔板周围加100μL PBS防止过度蒸发。 2.检测方法 在对应的检测时间点,从培养箱取出细胞,每孔加入10μL的CCK-8试剂,避光反映1-4h(具体孵育时间根据细胞数决定,一般OD值在0.8-1.5...
1.通常使用96孔板进行CCK8细胞增殖实验,将细胞消化重悬为细胞悬液,根据文献或前期实验确定的种板浓度,对细胞悬液进行稀释后每孔加入100μL细胞悬液,设置培养基组每孔加入100μL完全培养基,每组设置3-6复孔,周围一圈孔原则上不应作为样品孔,每孔加入100μL的PBS。 2.将96孔板放入细胞培养箱,继续培养12-24h至...
1、CCK-8基本概念 CCK-8: (Cell Counting Kit-8),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。 基本原理:CCK-8试剂中含有WST-8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。细...
CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验步骤 原理:CCK-8试剂盒中的WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)是一种黄色化合物,它在电子耦合试剂1-Methoxy PMS(1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色...
一、实验原理 CCK8法是一种基于WST-8的用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度、无放射性的比色检测法。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被活细胞线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于...
一、实验概述: Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的进行细胞增殖和毒性分析。 基本原理:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸...
实验材料及试剂 细胞,96孔细胞培养板、CO2培养箱、酒精灯、微量移液器、酶标仪、CCK-8试剂盒等。 实验步骤 Protocols 1. 取生长状态良好的细胞制备成一定浓度的细胞悬液,每孔100ul加入96孔细胞培养板中。通常细胞增殖实验每孔加入2×10³个/100ul 细胞,细胞毒性实验每孔加入5×10³个细胞/100ul (具体每孔...
CCK-8是一种高灵敏度、无放射性的比色检测法,用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数量,可替代传统的MTT法,常应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。尽管有人戏称CCK-8测细胞增殖实验只要有试剂盒就“有手就行”,但实际操作中仍有许多细节需要注意。本期细胞学堂将详细介绍CCK-8法的原理、...