1)CCK-8 加法:沿侧壁加入,避免产生气泡。还有一个技巧是用 1:1 体积的培养基混匀后加入,这样起到减小加样误差。 2)CCK-8 使用之前,先做个标准曲线。用不同的细胞数接种,然后加入 CCK-8 1 小时,2 小时,3 小时检测 450nm 以 OD 值 1.0--2.0 为标准选择细胞数。 3)确认药物跟 CCK-8 不反应。在培...
①由于每孔加入CCK-8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议直接配置含10% CCK-8培养基（...
将预处理好的细胞培养物加入含有CCK-8试剂的培养基中。通常,CCK-8试剂会与培养基充分混合,并与细胞接触。 4孵育 将培养皿放置在恒温恒湿的培养箱中,根据实验要求和细胞类型,进行适当的孵育。在孵育过程中,细胞内的还原酶会将CCK-8试剂还原为橙红色产物。 5吸光度测定 在孵育一定时间后,使用酶标仪或分光光度计...
答:可以,CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍,然后加入培养基总体积的20%即可,这样可减少误差。8. 🌈 只可以在450 nm波长处测OD值吗? 答:可以在450 nm波长处测OD值,但是若无此波长的滤光片,可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最...
答: 当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。问：在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？答: 可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如: 可以...
3、37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约需要培养4小时,如果不需要贴壁,这步可以省去。 4、加入10ul CCK8:由于每孔加入CCK8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议将枪头浸入培养液中加入且在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基(现用现配),以换液的形式加入。
③药物颜色的影响：药物本身的颜色可能与CCK-8反应后生成的橙黄色甲瓒产物颜色相近或产生叠加效应，从而干扰了吸光度的准确测定。另外pH变化会导致溶液中的酚红变色，影响OD值的检测。这些干扰可能使得不同组的差异较小。优化方法 ①药物预处理：在加入CCK-8之前，更换新鲜培养基以去除药物对CCK-8测定可能产生的影响。
CCK-8实验是一种常用的细胞活性检测方法,通过WST-8在细胞内的还原反应来评估细胞的增殖和毒性。以下是详细的实验步骤和注意事项: 实验方法 铺板 细胞计数:首先进行细胞计数,确定目标浓度为1*105个/mL。 计算所需培养基和细胞量:提前计算好所需的培养基和细胞量。
1. 不含细胞的培养基添加CCK-8:用于排除培养基对CCK-8的影响; 2. 加药实验时应该做一组不含细胞,添加药物,添加CCK-8的空白组,用于评估药物对CCK-8试剂的影响。 培养基或药物对CCK-8实验的影响 问:培养基中的酚红会对CCK-8数值产生影响吗? 答:CCK-8显色OD450nm,实际检测过程中酚红也会有较低的读值,...
【CCK8实验操作方法】一、实验原理CCK-8试剂是一种基于WST-8的细胞增殖检测方法，通过检测细胞增殖过程中产生的脱氢酶活性来反映细胞的生长情况。本实验旨在介绍CCK-8实验的操作方法，为科研工作者提供参考。二、实验步骤1. 细胞培养：将细胞接种于96孔板中，每孔加入适量培养基，放入培养箱中培养。根据实验需求，...