3. 实验操作:取不同浓度的CAT样品各1mL,分别加入1mL H2O2,混匀后立即计时。记录每10秒内CAT催化H2O2分解所生成的O2的量,持续记录3分钟。同时设置空白组,空白组只加入1mL H2O2和1mL 50mM PBS缓冲液。4. 数据记录:记录各时间点的吸光度值,并绘制出CAT活性曲线。5. 数据处理:根据CAT活性曲线,计算CAT...
(3)结果计算:以1 min内A240降低0.1(3支测定管的平均值)为一个酶活性单位(U),先求出3支测定管各自1min内A240降低值,按下式计算CAT活性。式中,△A240=As0-(As1+As2+As3)/3;As0:煮死酶液对照管吸光度;As1、As2、As3:样品测定管吸光度;Vt:酶提取液总体积(ml);Vs:测定时取酶液的体积...
总结: CAT活性的测定方法主要有碘化钾法和比色法,两种方法均是通过间接测定过氧化氢酶催化反应产物氧气的生成量来计算CAT活性。碘化钾法利用滴定I2溶液的消耗量计算CAT活性,而比色法则通过测定酶催化反应产物的吸光度或荧光强度来计算CAT活性。选择合适的CAT活性测定方法应根据实验需求和设备条件来决定。©...
4. 样品测定:取适量的酶液和反应液,混合后在240nm波长处测定吸光度,并根据标准曲线计算CAT活性。通过紫外吸收法测定CAT活性,我们可以得到CAT活性随时间的变化曲线。通过分析曲线的斜率,我们可以得到CAT的初速度。另外,我们还可以通过比较不同样品之间的CAT活性来了解不同样品抗氧化能力的差异。紫外吸收法是一种简...
常用的CAT活性测定方法包括: 紫外分光光度法:利用过氧化氢在紫外光下具有吸收的特性,通过测定反应液的吸光度变化来计算CAT活性。 酶偶联法:利用过氧化氢在过氧化物酶存在下被氧化水的特性,通过测定水的量来计算CAT活性。 抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定的实验步骤与注意事项 实验步骤 1. 样品准备 提取酶:根据...
学习果蔬组织中过氧化氢酶活性的测定原理和方法。二、基本原理 过氧化氢酶(Catalase, CAT)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化植物体内积累的过氧化氢(H2O2)分解为水和分子氧,从而减少H2O2对果蔬组织可能造成的氧化伤害。在CAT催化H2O2分解为水和分子氧的过程中,该酶起电子传递作用,而过氧化氢既是氧化剂又是...
1.2.3 CAT活性测定方法 方法①:文献[1]记述的碘量滴定法。碘量法利用H20z能将KI中的I一氧化,生成Iz,以淀粉作为滴定终点指示剂,用硫代硫酸钠滴定,计算出生成Iz的量,再换算成所消耗Hz0z的量。 方法②:文献[3]记述的紫外分光光度碘量法。该方法利用I在波长350 nm处有一个吸收高峰,吸光度与I的含量成正比来...
3.2.2方法步骤 (1)酶液的提取:称取剪碎混匀的植物样品(如叶片等)1.0 g置于研钵中,加0.2 g CaCO3粉 末和2 mL蒸馏水研磨匀浆,移入量瓶中定容至100 mL,摇匀,静置,取上清液10 mL移入100 mL 量瓶中,蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 (2)...
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法 一、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法) 1、试剂的配制 (1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8): A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g; B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。 分别用...
CAT 活性的计算公式是:CAT活性 = (ΔA/Δt) / ε其中,ΔA 表示 H2O2 吸光度的变化量,Δt 表示吸光度变化的时间,ε 表示 H2O2 的摩尔吸光系数。当使用紫莱贸生物科技(上海)有限公司网址:lmbio.com.cn QQ:1019057849 微信:Kimmy520xy电话:13585802892 外吸收法来测定 H2O2 含量时,有时可能会出现...