【小优细节君】WB检测caspase-1的活化(剪切体)为何无条带? 小优细节君曾分享过caspase,主要介绍了凋亡刽子手caspase-3的检测。本文将聚焦于细胞焦亡的关键指标——炎症之友caspase-1。 介绍 caspases在细胞焦亡、细胞因子成熟和分泌中的作用是...
进行caspase-1活化检测时，需要考虑细胞类型的影响，不同细胞对caspase-1活性调节存在差异。巨噬细胞中NLRP3诱导的caspase-1活性快速发生，导致GSDMD和pro-IL-1β迅速裂解，随后活性消失，细胞焦亡。中性粒细胞则表现出较弱且长效的caspase-1活性。检测过程中，细胞裂解液和培养基中的p20和p10蛋白含量存在...
Caspase-1与焦下垂和炎症小体活性，并发挥关键作用持家酶将pro-IL-1ß蛋白转化为活性IL-1ß细胞因子。（使用FLICA套件#98、#9122和#9162检测caspase-1.）请注意，巨噬细胞和单核细胞具有已显示在激活后能快速分泌caspase-1，4，5。与大多数其他蛋白酶一样，胱天蛋白酶的合成如下：经历蛋白水解成熟的前体具有...
一、Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 :原因分析 解决办法 一抗和二抗失效 1. 更换抗体;选择现用现配的工作液2.一抗和二抗不匹配 2. 更换为同种同属的同亚型的抗体底物3.发光液失效 3. 更换新的发光液4.抗体染色不充分 4. 增加抗体浓度;延长孵育时间5.被测样品中不含有目的蛋白质或者目的 ...
使用条带检测Caspase活性(绿色)通滤波器(488nm激发;520nm发射)。原子能的Hoechst 33342的染色使用UV过滤器进行(365nm激发,480nm发射)。只有一个单元格这三个细胞是凋亡的(中间)用FLICA FAM-VAD-FMK测定半胱天冬酶活性。它也有很多Hoechst染色的亮蓝色斑点,表明DNA正在断裂,细胞开始死亡。这个缺乏绿色染色右下角的...
蛋白样品经十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳,转至 PVDF 膜, 5% 脱脂牛奶封闭后,加入一抗孵育过夜,隔天加入二抗孵育 1 h ,滴加 ECL 发光液,暗室内曝光,扫描显影条带,采用 Image J 软件分析目的蛋白的灰度值并进行统计分析。 2.9ELISA检测外周血DAO活性和IL-18、IL-1β含量...
染色质 DNA 降解是凋亡性细胞 死亡的关键事件,它是通过 Caspase 酶的活化导致 DNA 酶抑制因子降解,激 活的 DNA 酶在 2 个核小体之间切割染色质 DNA,所以在 DNA 电泳图谱上出 现有规律的梯状条带。细胞焦亡也会出现 DNA 降解现象,但这是由 Caspase1 激活的核酸酶导致的,DNA 酶抑制因子并没有降解,DNA ...
蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,转至PVDF膜,5%脱脂牛奶封闭后,加入一抗孵育过夜,隔天加入二抗孵育1 h,滴加ECL发光液,暗室内曝光,扫描显影条带,采用Image J软件分析目的蛋白的灰度值并进行统计分析。2.9 ELISA检测外周血DA...
结果从外周淋巴细胞中经RT-PCR分别扩增出365bp和883bp片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一1234bp的条带,与预期序列长度一致.SOE产物与pIRES_2-EGFP经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后连接,茵落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ限制性酶谱分析酶解出1234bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与...
留取上清 液备用.采用 BCA 蛋白试剂盒检测上清液总蛋白浓 度.根据总蛋白浓度取适量上清液进行 SDS-PAGE 电泳 ,90 V 电泳 35 min 后转为 120 V 继续电泳 60 min,电泳结束后转移至 PVDF 膜上,按照目标蛋 白分子量大小切取条带,分别加入 NLRP3,Caspase- 1,IL-1β,IL-18,β-actin 蛋白一抗,4 ℃过夜...