1. 合理的凋亡诱导处理方式:设置药物诱导时间和浓度梯度预实验,以确定特定细胞系中药物诱导 caspase-3 活化的最佳条件,并用 staurosporine #9953(1μM for 3hours)或 etoposide #2200(25μM for 5 hours)处理 HeLa,NIH/3T3 或 C6 cells 作为 cleaved caspase-3 的阳性参照。 2. 贴壁细胞发生凋亡后会变得难...
1. 合理的凋亡诱导处理方式:设置药物诱导时间和浓度梯度预实验,以确定特定细胞系中药物诱导 caspase-3 活化的最佳条件,并用 staurosporine #9953(1μM for 3hours)或 etoposide #2200(25μM for 5 hours)处理 HeLa,NIH/3T3 或 C6 cells 作为 cleave...
- 结果分析:横坐标为活化的Caspase-3强度,活化的Caspase-3阳性的细胞即为发生凋亡的细胞(红色部分)。 变化四:DNA片段化 细胞在凋亡时,染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180~200bp及其整数倍的寡核苷酸片段,。DNA一旦发生片段化,在DNA双链结构上会出现很多缺口,可以使用FITC标记的DUTP...
一、Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及对底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]等的裂解。1. 方法收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭,室温1.5~2 h或4°C过夜→Caspase-3多抗或单抗室温反应1...
用户可以通过MICA一次性对四种荧光成像。在caspase 3/7活性检测法中,这有助于调查凋亡过程中额外的细胞成分的命运—实现100%时空相关性。图5中展示的案例显示,除了细胞核(DAPI)、激活状态的线粒体(TMRE)以及caspase阳性细胞(CellEvent™)以外,也对肌动蛋白细胞骨架(SiR-Actin)进行了染色。
本Caspase-3(激活型)抗体仅仅识别在Asp175位剪切后产生的19和17kDCaspase-3片段,即所谓的激活型Caspase-3。不识别全长的Caspase-3(32kD),也不识别Caspase-3在其它位点被剪切产生的Caspase-3片段。 本抗体可以通过免疫荧光或免疫组化检测细胞凋亡过程中Caspase-3的激活。本抗体染色呈阳性的细胞可以判定为Caspase-3...
本抗体可以通过免疫荧光或免疫组化检测细胞凋亡过程中Caspase-3的激活。本抗体染色呈阳性的细胞可以判定为Caspase-3被激活的细胞。 Caspase-3是细胞凋亡过程中最关键的执行分子(keyexecutioner)之一,可以剪切细胞凋亡过程中的许多关键蛋白,例如PARP。Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3(35kD),在Asp28和Ser...
流式细胞术分析收获细胞正常或凋亡细胞→PBS洗涤→加Ac-DEVD-AMC→37°C反应1 h→UV流式细胞计分析caspase-3阳性细胞数和平均荧光强度。Western blot 法 流式检测法 5. 形态学检测法 根据凋亡细胞固有的形态特征，使用透射电镜检测凋亡细胞形态变化。凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei...
Caspase-3仅在细胞凋亡时才会被剪切,因此大多数情况下样本无需药物处理即可检测到caspase-3前体蛋白。如果想要检测剪切后的Caspase-3,建议诱导样本进入凋亡通路,如使用星形孢菌素处理样本作为阳性对照,同时观察到caspase-3前体蛋白含量的减少。...
1.Fluorescence-conjugated Polyclonal Rabit Anti-Active Caspase-3 Antibody：多克隆抗体识别人类和小鼠的活化的Caspase-3，与人类Caspase-3的活化序列反应。此抗体常用于流式细胞仪分析Jurkat T细胞。抗体应4°C避光保存。2.Cytofix/Cytoperm Solution 在细胞内染色之前，进行细胞固定和破膜处理，此固定/破膜处理液是P...