2. CRIPSR基因座的表达:间隔区同源的外来核酸重新进入细菌,激活CRISPR阵列转录产生pre-crRNA,同时与pre-crRNA序列互补的tracrRNA也被转录出来,tracrRNA在转录后首先与Cas9蛋白结合,pre-crRNA和tracrRNA之间的互补碱基配对形成双链RNA,然后与Cas9结合形成复合物。 双链RNA与Cas...
在不同种类的细菌和古细菌中，存在不同成分和机制的CRISPR-Cas系统。CRISPR-Cas系统主要分为两类，1类CRISPR-Cas系统效应蛋白复合物存在多个亚基，而2类通过单一的Cas蛋白发挥功能。CRISPR/Cas9系统来自酿脓链球菌 (Streptococcus pyogenes) ，属于2类CRISPR系统，是目前应用最广泛的基因组编辑工具。CRISPR/Cas9系统由Cas9...
CRISPR-Cas9基因敲除系统(knock out)原理: CRISPR-Cas9基因敲除系统是Cas9内切酶切割双链DNA,生物体启动NHEJ修复途径,切割位点产生移码突变,导致基因沉默。首先在待敲除基因的上下游各设计一条向导RNA(向导RNA1,向导RNA2),将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中,向导RNA通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标...
作为研究最为深入的基因编辑CRISPR/Cas技术,主要包括sgRNA(single-guide RNA)和Cas9蛋白两个作用元件,可以实现基因定点的精确编辑。sgRNA引导Cas9蛋白识别基因组特定位点,精确剪切待编辑的生物体基因组,导致双链断裂(DSB, double strand break),生物体随后利用非同源末端连接(NHEJ)或同源重组修复(HDR)对双链断裂进行修复...
作为研究最为深入的基因编辑CRISPR/Cas技术,主要包括sgRNA(single-guide RNA)和Cas9蛋白两个作用元件,可以实现基因定点的精确编辑。sgRNA引导Cas9蛋白识别基因组特定位点,精确剪切待编辑的生物体基因组,导致双链断裂(DSB, double strand break),生物体随后利用非同源末端连接(NHEJ)或同源重组修复(HDR)对双链断裂进行修复...
CRISPR/Cas9系统属于II型CRISPR/Cas系统，来源于SF370酿脓链球菌株（Streptococcus pyogenes SF370），可利用单链向导RNA（single-guide RNA，sgRNA）序列和Cas9内切酶进行基因编辑，是一种基于RNA引导核酸内切酶的新型基因组编辑技术。CRISPR/Cas9系统由两个主要成分组成：Cas9蛋白和向导RNA（guide RNA，gRNA）。Cas9蛋白...
CRISPR/Cas9技术原理 CRISPR-Cas9技术包含两种重要的组分,一种是行使DNA双链切割功能的Cas9蛋白,而另一种则是具有导向功能的gRNA(guide RNA)。CRISPR-Cas9技术利用一段与靶序列互补的gRNA引导Cas9核酸酶对特异靶向DNA进行识别和切割,造成DNA的双链或单链断裂,...
CRISPR-Cas9技术利用CRISPR系统的导向性和Cas9的剪切能力，实现对特定DNA序列的定点编辑。通过引导RNA（sgRNA）的设计，Cas9可以精确定位到目标DNA序列，并在该位置引发双链断裂。然后，细胞的内在修复机制会介入，实现DNA修复或基因敲除等操作。第二部分：CRISPR-Cas9的应用 CRISPR-Cas9的应用范围广泛，涵盖了基础研究、...
1.设计gRNA：gRNA是由CRISPR-Cas9系统识别并切割目标DNA的关键部分。我们需要在目标基因中选择一个合适的靶点序列，设计gRNA来引导Cas9蛋白识别并切割该序列。耐思开发的Quick-KO®基因敲除试剂盒根据已知的人和小鼠编码基因，采用优化的预设计方案，相较于传统方案具有更高的敲除效率。2.构建质粒：质粒是携带CRISPR-...