Since its inception, CRISPR/Cas9 technology has attracted attention for its revolutionary potential in the field of gene editing. In 2020, the technology was awarded the Nobel Prize in Chemistry for the outstanding contributions of its develope...
在CRISPR基因敲入中，同源重组修复 (homology directed repair, HDR) 模板是一种用于指导修复DNA断裂并实现精确基因敲入的DNA序列，与目标基因组中被Cas9剪切的位置具有相同序列的同源臂。无HDR模板的CRISPR基因敲入，细胞通过非同源末端连接（non-homologous end joining，NHEJ）方式修复Cas9切割的DNA断裂。NHEJ修复方式速度...
CRISPR/Cas9可以用于改良作物和家畜的基因，提升作物产量、抗病性和环境适应性。例如，利用CRISPR技术增强作物的抗旱性或提高作物营养价值。7. 基因治疗：通过靶向修复突变基因，CRISPR/Cas9在治疗单基因遗传疾病方面展现了巨大的潜力。例如，研究人员正在探索利用CRISPR技术治疗囊性纤维化、镰状细胞贫血和杜氏肌营养不良症等...
【图4】CRISPR/Cas9介导的重组工程 [3] 在重组工程中,我们是将线性DNA (单链或双链) 电转到含有λ-Red重组酶的宿主细胞中,线性DNA一旦进入细胞便会在重组酶的驱动下参与同源重组,λ-Red重组酶是在制备感受态细胞的过程中诱导表达的。 在CRISPR/Cas9介导的重组工程中,我们需要将线性DNA和组成型表达sgRNA的质粒一...
浙江大学刘祥瑞、平渊和周天华课题组合作在Science Advances杂志上发表文章,报道了外泌体递送CRISPR-Cas9 RNP用于肝脏靶向的疾病治疗研究成果。该研究开发了一种方法,可以将Cas9 RNP装载到肝星状细胞(HSCs; LX-2)的外泌体中,用于治疗不同的肝脏疾病。与使用原代细胞相比,使用免疫细胞系具有均匀性、可重复性和操作性...
CRISPR 是在许多原核生物的基因组中都存在的一种DNA 序列,是细菌抵御病毒入侵的一种防御手段。科学家们受启发,开发出了CRISPR基因编辑技术。 CRISPR/Cas系统通过切割基因、插入新基因,能够快速、精确地修改目标生物的遗传信息。 CRISPR的应用范围很广泛:基因治疗、医疗保健、农业、生物生产等。
图1. CRISPR/Cas9介导的基因编辑示意图 二、敲除单克隆细胞株的构建 1. 确定基因，选择合适的细胞系 根据研究内容确定待敲除的目的基因和细胞系。敲除前应首先通过网站查找预测、文献查阅等明确待敲除基因的功能并评估敲除此基因是否致死；在细胞系的选择上，优先选择容易转染且单克隆增殖能力较强的细胞。2. gRNA的...
CRISPR-Cas9技术 CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过单向导sgRNA识别目的基因组序列,引导Cas9核酸酶对基因组进行有效切割,形成DNA双链断裂,通过细胞自身修复机制实现基因敲除、敲入、突变等,达到基因编辑目的。由于CRISPR-Cas9技术靶向灵活、编辑效率高、操作简便等特点逐步被应用于基因改造、药物开发、遗传病治疗等方面。
报道称，这种基因组编辑技术为在几乎所有生物体中的大量应用操作打开了大门。自2012年这一编辑技术由沙尔庞捷和杜德纳开发以来，CRISPR/Cas9已用于寻找针对多种疾病(包括癌症和艾滋病等)的新疗法，以及培育植物新品种等。为什么说这是革命性成果？报道称，这项技术可随意改变生物基因组。CRISPR/Cas9将对未来的医学产生...