将Donor DNA插入到Plasmid#2上本质上也改变了同源重组的方式,不再是线性Donor DNA与环状基因组(未被切割)或线性基因组(被切割)之间发生重组,而是环状Donor DNA与线性基因组(被切割)之间发生重组。重组要发生,基因组和Donor DNA之间必须有一方是线性的,环状基因组与环状Donor DNA之间发生重组的概率极低。
在CRISPR技术成为一种常见的治疗模式之前,实现稳定、高效和安全的体内递送是必须克服的挑战。CRISPR系统如质粒DNA(plasmid DNA, pDNA)、mRNA和核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNPs)在直接递送后易在体内降解和免疫清除,因此需要递送载体的帮助。腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)载体因其负载能力有限、缺乏特异性...
在CRISPR技术成为一种常见的治疗模式之前,实现稳定、高效和安全的体内递送是必须克服的挑战。CRISPR系统如质粒DNA(plasmid DNA, pDNA)、mRNA和核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNPs)在直接递送后易在体内降解和免疫清除,因此需要递送载体的帮助。腺相关病毒(Adeno-ass...
EP管B:2.5 μg plasmid DNA + 125 μL Opti-MEM+ P3000 混匀 将EP管B混合物稀释到EP管A中,轻柔混匀后室温孵育10 minutes 将plasmid DNA-Lipo 复合物均匀滴加到细胞上 注意:在准备DNA-Lipo复合物时,无血清培养基不能代替Opti-MEM,Opti-MEM是增加转染效率的关键之一,转染时细胞培养基无需更换为无血清培养...
(1) 转化Plasmid#2比共转Plasmid#2和线性Donor DNA效率更高; (2) Donor DNA在质粒上不会受到核酸外切酶的攻击; (3) Donor DNA还可以随着质粒一起复制,增加自己的拷贝数。 这样一来,编辑效率就显著提高了。将Donor DNA插入到Plasmid#2上本质上也改变了同源重组的方式,不再是线性Donor DNA与环状基因组(未被切...
HH-CAS-0636-His-MBP-TEV-FnCpf1(Plasmid #90094)原核表达cas12a HH-CAS-174pLV-U6-CasRxN-T2A-EGFP-IRES-Puro HH-CAS-173pLenti-gRNA-SFFV-CasRX-puro HH-CAS-172Lenti-RxgRNA-puro 不表达CasRx(RfxCas13d) HH-CAS-171pMSCV-CasRx-gRNA-puro HH-CAS-170pXR001-EF1a-CasRx-2A-BSD HH-CAS-169pXR001...
)2.从MolecularCloud上获得:pEcCas:https://www.molecularcloud.org/plasmid/pEcCas/MC-0101208.htmlpEcgRNA:https://www.molecularcloud.org/plasmid/pEcgRNA/MC-0101209.html3.有反映被美国制裁无法从上述两机构获得质粒的,请与我们单位签署协议。 学术版:学术机构可通过下载以下链接中的“材料转移协议(学术)”...
▲图二:慢病毒介导CAR在T细胞表面表达的示意图,pREV、pRRE以及pVSVG为辅助质粒(helper plasmid) 质粒载体有什么作用呢?大多数质粒的作用就是把装在多克隆位点的基因或DNA序列在细胞中表达(expression)成蛋白质。这里举例的这种质粒载体DNA是经过...
实验方案正文--cloning sgRNA into pSpCas9 plasmid ~ 3 Days 在这里我直接选择将sgRNA整合到pSpCas9质粒中,只转染一个质粒的方法,同时该质粒带有EGFP标记,可用于筛选。 1. 实验准备 细胞:293T工具细胞,目的细胞,DH5α、stal3感受态细胞(可自行制备)
lenti-SpCas9 puro (Plasmid #104994)慢病毒基因CRISPR编辑质粒只表达CAS9 HH-CAS-169pXR001-EF1a-CasRx-2A-EGFP(Plasmid #109049) HH-QT-040pJYS1Ptac (Plasmid #85545)谷氨酸棒状杆菌基因编辑质粒 HH-QT-041pJYS2_crtYf(Plasmid #85544)谷氨酸棒状杆菌基因编辑质粒 HH-QT-042pJYS3_ΔcrtYf(Plasmid #8...