基因编辑小鼠主要分为基因敲除(KO)、条件性敲除(CKO)及基因敲入(KI)等几种方式。其中基因敲除鼠(KO)是基因编辑鼠中常用、也是容易构建的模型鼠,但是这样一种模型鼠的设计和构建过程依然复杂。本文就以CRISPR/Cas9技术为例,为大家科普一下基因敲除鼠的设计、构建、鉴定与使用方法。 基于CRISPR/Cas9技术基因敲除鼠的...
▌条件性基因敲除(Conditional Knockout, CKO)小鼠 研究表明,约 1/3 的小鼠基因对于胚胎发育是必不可少的,即敲除该基因会使小鼠胚胎死亡,不能生长发育。一种 Cre/Loxp 重组的基因编辑系统应运而生,该系统可以人为控制敲除基因的时机或位置,从而在时间上保证小鼠的发育,或是在空间上控制基因敲除的范围。 基本原理...
特别是对于CKO、CKI这些组织特异性的模型小鼠,需要与cre工具鼠配繁,才能得到在特定组织敲除或敲入的目的小鼠。而基于cas9[1]技术制作的CKI小鼠,对于不同的构建策略,繁育之路也是不同的。这一点需要涉及Cas9-CKI繁育工作的研究人员注意。否则,三周怀胎,一朝分娩,含辛茹苦到断乳,最终还是宝宝心里苦。 Cas9-CKI小鼠的...
▌条件性基因敲除(Conditional Knockout, CKO)小鼠 研究表明,约 1/3 的小鼠基因对于胚胎发育是必不可少的,即敲除该基因会使小鼠胚胎死亡,不能生长发育。一种 Cre/Loxp 重组的基因编辑系统应运而生,该系统可以人为控制敲除基因的时机或位置,从而在时间上保证小鼠的发育,或是在空间上控制基因敲除的范围。 基本原理...
若电泳结果有条带1或条带3,则可能是由于Cre删除效率低,cKO区域没有发生删除。 注:电泳结果可能会出现其他删除不完全的结果,这与Cre鼠的删除效率有关,也与实验取材有关,比如删除是发生在内皮细胞,但是取材不是特别精细,含有其他组织就会影响结果的判断。
特别是对于CKO、CKI这些组织特异性的模型小鼠,需要与cre工具鼠配繁,才能得到在特定组织敲除或敲入的目的小鼠。而基于cas9[1]技术制作的CKI小鼠,对于不同的构建策略,繁育之路也是不同的。这一点需要涉及Cas9-CKI繁育工作的研究人员注意。否则,三周怀胎,一朝分娩,含辛茹苦到断乳,最终还是宝宝心里苦。
若电泳结果有条带1或条带3,则可能是由于Cre删除效率低,cKO区域没有发生删除。 注:电泳结果可能会出现其他删除不完全的结果,这与Cre鼠的删除效率有关,也与实验取材有关,比如删除是发生在内皮细胞,但是取材不是特别精细,含有其他组织就会影响结果的判断。
特别是对于CKO、CKI这些组织特异性的模型小鼠,需要与cre工具鼠配繁,才能得到在特定组织敲除或敲入的目的小鼠。而基于cas9[1]技术制作的CKI小鼠,对于不同的构建策略,繁育之路也是不同的。这一点需要涉及Cas9-CKI繁育工作的研究人员注意。否则,三周怀胎,一朝分娩,含辛茹苦到断乳,最终还是宝宝心里苦。
基因编辑从功能上一般分为以下几类:基因敲除(Knockout, KO),条件性基因敲除(Conditional Knockout, CKO),基因敲入(Knock-in, KI)。 ▌基因敲除(Knockout, KO)小鼠 基本原理:通过基因编辑技术或基因打靶技术将小鼠体内的基因从基因组上删除,或者造成移码突变。具体来说,是把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者...
通过CRISPR/Cas9技术制备特定基因修饰的小鼠模型。CRISPR/Cas9是目前最常用的基因编辑技术,可用于制备CKO/KO/KI/PM等类型基因编辑小鼠。 药康优势 1.高质量:执行最严格质控标准,首创Realtime PCR检测,0随机插入,0串联重组 2.高效率:GPTech优化高效的基因编辑平台,高一次成功率,交付周期更短 3.多修饰:靶基因多位点...