在crRNA的5'端加上7-甲基鸟苷帽或者在3'端加上一条聚A尾巴,可分别提高5'端和3'端的稳定性,延长crRNA的半衰期。6. 无碳连接的修饰。使用无碳连接将两个或更多个crRNA片段连接在一起,这种连接方式可以避免被内源性RNA酶识别和切割,从而产生更长更稳定的crRNA。单crRNA与crRNA库：1. 单crRNA。这种策略使用一...
1. cas12a是一个多功能蛋白，含有双链DNA结合域和核酸酶域。其中核酸酶域具有DNA内切酶活性，可以非特异性切割DNA。2. crRNA是处理过的RNA分子，含有与靶DNA互补的序列，可以特异性识别靶DNA。多个crRNA可以成簇，以提高靶向效率。3. 在不存在靶DNA的情况下，cas12a的核酸酶活性是抑制的。crRNA与cas12a结合后，也...
1类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌当中最为常见,所占比例在所有已鉴定CRISPR-Cas基因座中高达90%。2类CRISPR-Cas系统包括剩余的10%几乎只存在于细菌中,并组装成一个核糖-核蛋白复合物,由crRNA与Cas蛋白组成,crRNA包含靶向特定DNA序列的信息。 目前所流行的Cas9与...
最近，美国爱荷华州立大学的研究人员在Nuleic Acids Research 期刊上发表名为CRISPR-Cas12a exhibits metal-dependent specificity switching的论文，该研究揭示了Cas12a表现出金属依赖的特异性转换的结果。Cas12a的特异性是由crRNA和DNA靶标之间的互补性、DNA靶标旁边的原间隔短回文序列邻近基序（protospacer adjacent motif...
Cas12蛋白只需要识别crRNA就能有效切割单链DNA和双链DNA。Cas12蛋白的RuvC和核酸酶叶(NUC)结构域具有裂解活性。与Cas9相同，Cas12a在PAM（5’-TTTV-3’， V为A/C/G）序列旁边存在一个潜在靶点，一旦与Cas12相遇，就可以启动R-loop，在crRNA和目标DNA链之间形成碱基对杂交，匹配目标序列的1～17个碱基对，形成R...
CAS12a crRNA 结构作为 CRISPR-Cas 系统的一部分,具有独特的结构和功能。 CAS12a crRNA 结构的概述:CAS12a crRNA 是一种 guide RNA,它的主要功能是在 CRISPR-Cas 系统中引导 Cas12a 蛋白识别并切割外源 DNA。CAS12a crRNA 结构由三个主要部分组成:柄(stem)、环(loop)和臂(arm)。柄和环部分负责与 Cas12a ...
早在2020年,该团队已发表一篇使用工程化的crRNA能够增强Cas12a的反式切割活性的文章1,表明Cas12a具有潜在的RNA识别特性。基于此,作者在本文系统性地提出了基于Cas12a的不需扩增和逆转录,可直接检测RNA的创新性新策略。 研究结果 首先,为测试Cas12a可识别的最小靶标长度,作者设计了不同长度的ssDNA靶标,结果表明,14...
Crispr cas12a是一种可编程的DNA内切酶,它可以根据crRNA的设计实现对不同DNA的精确识别与切割。在靶DNA的指导下,Cas12a核酸酶域会被激活并进行DNA内切,实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具,crRNA的设计决定了其特异性。但Cas12a附带切割效应也使非特异性信号放大成为可能,这需要在应用...
crRNA和Cas12a形成RNP复合物,该复合物组装在AuNP支架上。(b)响应于200 pM miRNA,实时监测由CRISPR纳米机器产生的荧光。(c) 凝胶电泳表征30 nt底物及其被反式切割的产物。DNA和RNA分别用于激活溶液中的CRISPR纳米机器或游离的CRISPR RNP。(d)通过CRISPR纳米机器和溶液中的游离CRISPR RNP对底物反式切割产生的荧光。
crRNA和Cas12a形成RNP复合物,该复合物组装在AuNP支架上。(b)响应于200 pM miRNA,实时监测由CRISPR纳米机器产生的荧光。(c) 凝胶电泳表征30 nt底物及其被反式切割的产物。DNA和RNA分别用于激活溶液中的CRISPR纳米机器或游离的CRISPR RNP。(d)通过CRISPR纳米机器和溶液中的游离CRISPR RNP对底物反式切割产生的荧光。