1类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌当中最为常见,所占比例在所有已鉴定CRISPR-Cas基因座中高达90%。2类CRISPR-Cas系统包括剩余的10%几乎只存在于细菌中,并组装成一个核糖-核蛋白复合物,由crRNA与Cas蛋白组成,crRNA包含靶向特定DNA序列的信息。 目前所流行的Cas9与...
3. crRNA与CAS12a的结合会引起CAS12a构象的变化,其中REC1和WED结构域会发生向REC2靠拢的构象重排。这有利于REC1和REC2结构域之间的相互作用,激活CAS12a的内切酶活性。4. crRNA通过其重复序列的32nt与CAS12a的REC1结构域的9个α螺旋进行的互补配对而结合。crRNA的SPACER序列剩余部分则伸出CAS12a表面,用于识别靶DNA。
最近，德克萨斯大学奥斯汀分校的研究员在《Molecular Cell》上发表研究成果“Cas12a domain flexibility guides R-loop formationand forces RuvC resetting”，该研究通过cryo-EM技术进一步探索Cas12a的结构和功能，所获得的结构上的见解合理解释了Cas12a的DNA靶向行为和更高的特异性。一、Cas12a在切割过程中的结构 为了捕...
对Cas12a酶的金属离子依赖性进行实验，其结果表明Cas12a的第二链切割步骤在低Mg2+浓度下受到显著影响，尤其是对于AsCas12a，这表明Cas12a的切割活性具有金属离子依赖性。这些研究结果揭示了Mg2+浓度的变化对Cas12a的特异性有显著影响，在低Mg2+浓度下，Cas12a对PAM近端的突变更加宽容，而对PAM远端的突变则宽容度降低。
Crispr cas12a是一种可编程的DNA内切酶，它可以根据crRNA的设计实现对不同DNA的精确识别与切割。在靶DNA的指导下，Cas12a核酸酶域会被激活并进行DNA内切，实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具，crRNA的设计决定了其特异性。但Cas12a附带切割效应也使非特异性信号放大成为可能，这需要在...
图1. 两类CRISPR/Cas系统，图片来源Makarova KSet al, 2020 CRISPR/Cas12属于2类V型RNA引导的核酸内切酶。该蛋白家族中研究较多是Cas12a核酸酶，目前最常用的Cas12a蛋白来自氨基酸球菌属的BV3L6菌株和毛螺科细菌(LbCas12a)。Cas12a蛋白已被广泛应用于包括细菌、酵母、植物和人类细胞在内的多个物种。Cas12a蛋白由...
Cas12a的顺式切割 Cas12a的反式切割 舒桐服务 Cas12a又称为Cpf1,Class 2类CRISPR系统,与Cas9一样通过识别特异性PAM序列行使核酸内切酶功能从而产生DNA双链断裂。与Cas9系统在crRNA加工、PAM识别机制、切割方式等方面存在明显不同(表1)。Cas12a因其独特的作用机制,在基因编辑和核酸检测领域大放异彩。小编将从以下几...
到目前为止,大量研究表明CRISPR-Cas12a核酸酶仅限于检测DNA底物(包括dsDNA和ssDNA),不可直接以RNA作为靶标。以往的研究中,用Cas12a检测RNA靶标时,依赖前置逆转录步骤,不仅增加了检测时间和成本,也增加了分…
1. 核酸酶结构域不同，Cas12b蛋白的结构域是RuvC；Cas12a蛋白的结构域是RuvC和Nuc。2. 向导RNA不同。Cas12b需要crRNA和tracrRNA；Cas12a只需要crRNA，不用tracrRNA。3. 酶切方式不同。Cas12b酶切7个交错核苷酸；Cas12a酶切的是交错末端，5' overhangs。4. 应用技术不同。Cas12b蛋白应用的技术是HOLM...
三、Cas12a与Cas9的区别 1.crRNA 对于Cas9，当外源核酸入侵后，细菌会转录出tracrRNA，同时Cas9蛋白被转录翻译，而Cas1、Cas2和Csn2会附着在Cas9蛋白上；然后CRISPR序列在前导区的调控下转录生成Pre-crRNA，Pre-crRNA与tracrRNA通过碱基互补配对形成双链RNA，同时与Cas9蛋白组装形成复合体，最终根据入侵核酸的类型选取...