CAS12a是一种用于生物学研究的DNA赛选系统。CAS：代表CRISPR-associated系统12：指的是系统中所用到的CRISPR 12蛋白a：代表系统中使用的来源于Prevotella和Francisella (P/F)类型I-C系统(I-C符合其中第12种蛋白)。CRISPR RNA(crRNA)是CRISPR系统中重要的一种RNA分子。它起到导航作用,指导CRISPR相关蛋白(如CAS12a)...
1类CRISPR-Cas系统在细菌和古细菌当中最为常见,所占比例在所有已鉴定CRISPR-Cas基因座中高达90%。2类CRISPR-Cas系统包括剩余的10%几乎只存在于细菌中,并组装成一个核糖-核蛋白复合物,由crRNA与Cas蛋白组成,crRNA包含靶向特定DNA序列的信息。 目前所流行的Cas9与...
在机制上，与Cas9蛋白不同，Cas12a蛋白不需要tracrRNA进行pre-crRNA加工，也不需要RNaseIII。Cas12a的WED结构域中存在核糖核酸酶位点，允许将pre-crRNA自主加工为成熟的crRNA。Cas12a的crRNA明显短于Cas9向导RNA（sgRNA或crRNA+ tracrRNA）。这允许紧凑的Cas12a CRISPR阵列，可用于同时靶向多个位点。Cas12蛋白只需要识别cr...
1. 核酸酶结构域不同，Cas12b蛋白的结构域是RuvC；Cas12a蛋白的结构域是RuvC和Nuc。2. 向导RNA不同。Cas12b需要crRNA和tracrRNA；Cas12a只需要crRNA，不用tracrRNA。3. 酶切方式不同。Cas12b酶切7个交错核苷酸；Cas12a酶切的是交错末端，5' overhangs。4. 应用技术不同。Cas12b蛋白应用的技术是HOLM...
1、本研究发现了Cas12a可以识别split靶点,从而激活反式切割活性。 2、本研究创新性地提出了基于Cas12a的RNA直检平台:SAHARA,不需反转录,不需扩增。 3、本研究发现AsCas12a本身就可以直接检测RNA靶标(图2 c),那么是否可以筛选AsCas12a的高同源性蛋白或者直接对AsCas12a进行改造或体系优化,从而实现更简单、更直接...
最近，美国爱荷华州立大学的研究人员在Nuleic Acids Research 期刊上发表名为CRISPR-Cas12a exhibits metal-dependent specificity switching的论文，该研究揭示了Cas12a表现出金属依赖的特异性转换的结果。Cas12a的特异性是由crRNA和DNA靶标之间的互补性、DNA靶标旁边的原间隔短回文序列邻近基序（protospacer adjacent motif...
一、Cas12a在切割过程中的结构 为了捕获R-loop形成过程中 WT Cas12a 的各种中间体，研究人员将WT Cas12a 和与crRNA具有不同互补序列长度的靶标DNA 底物一起孵育并获取冷冻电镜图。从中，研究人员获得了六个不同的R-loop中间结构，标称分辨率范围为3.3至3.7 Å。冷冻电镜结果中WT Cas12a的这些结构描述了R-...
Crispr cas12a是一种可编程的DNA内切酶，它可以根据crRNA的设计实现对不同DNA的精确识别与切割。在靶DNA的指导下，Cas12a核酸酶域会被激活并进行DNA内切，实现了对靶DNA的高效识别和放大。这一原理使其可以作为DNA诊断工具，crRNA的设计决定了其特异性。但Cas12a附带切割效应也使非特异性信号放大成为可能，这需要在...
基于CRISPR/Cas12a广泛的应用场景,翌圣镁孚泰生物ZymeEditor(点击了解更多)酶改造及发酵纯化工艺平台新开发了来源于细菌Agathobacter rectalis的ArCas12a,与其它Cas12a(LbCas12a/AsCas12a)相比,其具有更高的温度适应性(25-55℃),非常适用于基因组编辑及核酸检测等应用场景。
Cas12a由REC叶和Nuc叶组成双叶结构,Cas12a具有切割能力的结构域位于Nuc叶上。Nuc叶由RuvC结构域、PI结构域和WED结构域组成,其中用于处理自身crRNA的RNase位点位于WED结构域;用于切割DNA的DNase位点位于Nuc和RuvC结构域之间的界面上,并且Ruvc结构域含有催化中心,能够准确识别目标序列,并在Mg2+的催化下进行精确的DNA切割,...