相比起来,体内CAR-T在治疗过程,是通过一个单一的,普遍适用的药物产品,编码CAR的系统递送载体将直接用于转导患者的T细胞,并可以在一两天内对新基因进行解码并产生CAR,不但可以为患者减少治疗周期,节省时间,操作相对简单,还可以规避移植物与宿主间的反应以及制造相关的复杂问题。 不但如此,复杂制造工艺使传统CAR-T成为一...
摘要:本发明提供了一种CAR‑T治疗载体及其构建方法和应用。该CAR‑T治疗载体,包括AXL scFv;所述AXL scFv包括依次连接的AXL单链抗体轻链可变区,其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示;linker接头,其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;AXL单链抗体重链可变区,其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。构建的CAR‑T治疗载体能够很...
9.根据权利要求8所述肺癌的双靶点CAR-T治疗载体的应用,其特征在于,PSPAX2、pMD2G、肺癌的双靶点CAR-T治疗载体在体系中有固定的含量比例。 10.一种CAR-T细胞,其特征在于,采用权利要求8的应用方法制备得到。 说明书 技术领域 本发明涉及一种CAR-T治疗载体,尤其是涉及肺癌的双靶点CAR-T治疗载体及其构建方法和...
在本发明的第二方面,提供一种上述car-t治疗载体的构建方法,包括以下步骤:(1)将如seqidno.1所示的含氨苄青霉素抗性基因ampr序列、如seqidno.2所示的原核复制子pucori序列、如seqidno.3所示的病毒复制子sv40ori序列、用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件、如seqidno.11所示的zsgreen1绿色荧光蛋白、如seqidno.12...
本发明公开了用于CAR‑T细胞制备的慢病毒载体及其构建方法和在制备抗肿瘤细胞制品中的应用,同时本发明还建立了荧光定量PCR检测病毒滴度的方法,为临床应用提供了检测标准。本发明提供的慢病毒载体具有长度小,在T细胞中能够稳定、高效表达CAR基因,在病毒包装细胞如HEK293T中可以包装出高滴度的慢病毒、不含GFP、Neomycin等...
在利用CAR-T进行抗肿瘤的治疗过程中,最为关键的是载体的构建,虽然对CAR-T制备载体的构建技术已经有了较多报道,但是,目前尚无可有效对抗结肠癌细胞的PD-L1对T细胞的干扰并对结肠癌细胞具有良好的识别力的CAR-T治疗载体及相关研究。 发明内容 本发明的目的在于提供一种用于在结肠癌治疗中应用的CAR-T载体及其构建方法...
[0021]提供一种针对胰腺癌的双靶点CAR‑T治疗载体的构建方法。 [0022]将上述CAR结构按照基因序列, 采用常规生物合成方法进行合成, 合成后的CAR存在于PUC57质粒载体上; 慢病毒表达载体pLenti6.3/V5购自invitrogen。将PUC57质粒载体和慢病毒表达载体均采用BamHI、 XhoI双酶切, 将酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分离, 回收...
本发明的用于制备CAR‑T的慢病毒载体应用广泛,可用于构建单CAR及多CAR、表达自杀基因或筛选基因等,也可用于构建表达细胞因子的第四代CAR,能满足CAR‑T中慢病毒载体质粒同时表达多个基因的要求;利用该慢病毒载体包装的慢病毒滴度高,利用该慢病毒载体质粒制备的慢病毒感染T细胞的效率高,并且制备的CAR‑T细胞具有较...
神经胶质瘤治疗中应用的car-t载体的构建方法为:将car基因序列合成后存在于puc19质粒载体上;将puc19质粒载体和慢病毒表达载体均采用ecorⅰ、notⅰ双酶切,将酶切产物经过琼脂糖凝胶电泳分离,回收目的条带,得出载体和目的片段的浓度,将两者按照摩尔比为1:5进行连接转化后进行质粒提取,最终获得含有特定car结构的治疗载体。
本发明涉及提供了结肠癌的双靶点CAR‐T治疗载体及其构建方法和应用。双靶点CAR‑T治疗载体由慢病毒表达载体pCDH‑EF1α‑MCS‑(PGK‑Puro)和CAR结构两部分构成。所述的CAR结构具体为Igkappa‑iRGD‑CEA scFv‑(G<Sub>4</Sub>S)<Sub>5</Sub>‑Her‑2scFv‑CD8α‑CD28‑CD137‑CD3ζ...