CAR-T 细胞的体外表征通常集中于三种主要的效应细胞功能：细胞溶解活性、细胞因子产物和增殖。目前，通过...
CAR-T 细胞疗法技术流程 第一步:构建靶向肿瘤细胞相关表面抗原的CAR分子第二步:从患者外周血单个核细胞(PBMC)中分选纯化出T细胞第三步:采用电穿孔、包病毒等方式将提前设计好的CAR分子导入T细胞中第四步:筛选成功导入CAR分子的CAR-T细胞,并在体外刺激其扩增第五步:将扩增好的CAR-T细胞回输到患者体内第六步:严密...
出来不受MHC限制,CAR-T疗法也不受肿瘤细胞的蛋白质抗原限制,CAR-T可以利用肿瘤细胞的糖脂类非蛋白质抗原,更能够多维度识别抗原。 五、CAR-T具有一定的广谱可复制性。由于某些位点会在多种肿瘤细胞中表达,如EGFR,针对这种抗原的CAR基因一旦构建完成,便可以被广泛利用...
CAR-T是通过基因工程技术构建的。以下是CAR-T构建的一般步骤: 提取T细胞:从患者体内采集外周血,并从中分离出T细胞。 设计CAR基因:根据患者的肿瘤类型和抗原表面分子特点,科学家们设计并构建CAR基因。CAR基因一般包括一个外部的抗原识别区、一个细胞膜跨膜区和一个内部的T细胞激活区。 转染CAR基因:将CAR基因导入到T...
基因编辑技术可以实现外源基因的靶向插入或内源基因的定向敲除,精确构建CAR-T细胞,已在同种异体CAR-T疗法的开发中被广泛使用。基因编辑应用于同种异体CAR-T,可以限制移植物抗宿主病(GVHD)和免疫排斥反应的发生,同时也能够实现CAR-T细胞功能的增强。 ▲ 利用CRISPR/...
CAR-T细胞的构建原理主要包括以下几个步骤: 1. 采集患者自身的T细胞:采集患者的外周血或者骨髓中的T细胞,作为CAR-T细胞的前体细胞。 2. 提取T细胞:利用细胞分离技术,从采集到的细胞样本中提取出T细胞。 3. 转染CAR基因:通过病毒载体或基因枪等途径将带有CAR基因的质粒导入T细胞中,使其表达CAR。 4. 培养CAR-T细胞...
CAR是以抗体的scFv(单链可变区)识别肿瘤抗原的。因此,与单抗的研发路径类似,CAR-T的研发也需要获取和筛选单抗。杂交瘤技术是获取单抗的基础,该技术可获得相应的分泌单抗的杂交瘤细胞。筛选出亲和力高的单抗后,将相应的杂交瘤细胞冻存传代形成稳定的细胞株,用于CAR结构中scFv序列的构建。
这个研究首先构建了一个体外模型,用表达特异性抗原的肿瘤反复地刺激CAR-T细胞,来模拟肿瘤微环境中CAR-T遭受的压力,然后观测受到影响后CAR-T相应的基因表达和功能变化。 在杀肿瘤的细胞毒性方面,和没受过刺激的(Day 0) CAR-T相比,刺激后第28天的CD8+ CAR-T细胞既控制不了肿瘤生长,也不生产细胞因子,说明特异性抗...
如何构建通用型、可调控的CAR-T技术成为该领域重要研究方向。上述两个团队历经近4年研究，在国际上首先报道采用自身抗原特异性CAR-T治疗自身免疫病。为解决传统上一种CAR-T只能杀灭一种细胞的问题，研究者开发了基于连接臂分子的通用型CAR-T。这是一种可识别异硫氰酸荧光素（FITC）的惰性CAR-T。连接臂分子含FITC...