激活后的NK细胞在细胞培养板或培养瓶中静置培养,放于37℃,5%CO2培养箱进行预扩增7天左右(期间采用携带CAR基因的病毒对NK细胞进行基因转导)。 大量扩增 图2:Xuri W25细胞扩增系统 当预扩增达到一定细胞量时,按照Xuri W25操作规程,将预扩增的细胞接种至Xuri 2 L一次性细胞培养袋中,细胞密度维持1e6-1.5e6 cells/...
本发明提供一种CART细胞的培养基及培养方法,包括以下重量份原料:肌酸磷酸32～60份,焦磷酸12～34份,白细胞介素12～50份,碱性成纤维细胞生长因子10～40份,苯乙酸胍15～35份,巯基乙酸11～38份,角鲨烷8～15份,转铁蛋白2～9份,经脐带血分离得到CART细胞进行体外培育,利用本发明的配制的培养基结合培养方法进行培育...
经典的iPSC-NK细胞的分化方案是依赖饲养层细胞的培养方法,需要将iPSCs与小鼠基质细胞系M210-B4共培养19-21天,诱导分化为造血干细胞 (HSC),然后分离出CD34+ CD45+造血祖细胞后,再与小鼠基质细胞系AFT024或EL08-1D2以及细胞因子混合物(包括IL-3、IL-7、IL-15、SCF和Flt-3L)共培养4-5周以产生分化为成熟的NK...
缺乏HLA抗原表达的K562细胞是基因编辑最常用瘤细胞系,通过基因工程方法将使其表达NK扩增所需细胞因子和共刺激因子,如膜结合蛋白IL-15,IL-21和4-1BB配体,新的对NK细胞激活和扩张协同刺激因子仍在不断探索。OX40受体刺激增加NK细胞IFN-γ产生、细胞毒性和增殖能力。 人前列腺癌细胞系衍生物PC3PSCA也被基因修饰用来...
随着基因修饰技术的进步,许多方法被用于产生CAR-NK。两种主要方法是病毒转导 (使用慢病毒或逆转录病毒) ,或转染裸质粒DNA、转座酶DNA介导的整合以及mRNA电转。 慢病毒 慢病毒能够高效地转导周期性和非周期性细胞,在基因治疗领域得到了广泛的应用。迄今为止,已有14篇关于原代CAR-NK细胞和44篇关于CAR-NK细胞系的研究...
CAR-NK细胞疗法具有巨大的潜力,但需要解决一些基本问题,以扩大其临床应用。 首先,NK细胞体外培养扩增是第一道障碍。单个供体的NK细胞数量不足以进行治疗,这使得NK细胞的扩增和激活变得非常关键。通常需要两到三周来培养NK细胞。供体细胞数量的可用性仍然是一个障碍。此外,必...
(1)NK细胞的扩增和纯化 ACT需要大量具有高细胞毒性的NK细胞,但其在外周血淋巴细胞中所占比例不超过10-15%,需要体外培养扩增。将表达白介素15(IL-15)和黏附分子4-1BBL的K562饲养细胞与外周血自然杀伤细胞共培养是一种较好的方法,一项用含有IL-2、IL-21的GMP兼...
采用CD34+ HPC分化是获得大量成熟NK细胞的另一种方法。可从骨髓、胚胎干细胞、动员的PBMC或UCB中分离CD34+ HPC,然后扩增并分化为成熟的NK细胞。 由于具有无限增殖能力,iPSC已成为重要CARNK细胞来源。与分化的NK细胞相比,iPSC可更稳定表达CAR。CAR-iPSC可在含有SCF、VEGF 和BMP4的培养基中分化为HPC,然后用含有IL3...
• 在特定的扩增培养基中扩增NK细胞；• 建立的CAR㎏细胞通常采用静脉注射，以选择性杀死肿瘤细胞。CAR-NK，不仅通过CAR特异性识别抗原表达肿瘤的能力，而且通过NK细胞受体自身来消除肿瘤。NK细胞的活性取决于是刺激和抑制信号的平衡，而不是抗原特异性。这些信号激活衔接蛋白，释放穿孔素和颗粒酶，并控制细胞因子的...