物美价廉,NK-CAR-iPSC-NK 细胞有效击退卵巢癌 2018年6月18日,来自加利福尼亚大学圣地亚哥医学院(UCSD)和明尼苏达大学的研究人员在《Cell Stem Cell》发表了研究报告,他们研究出的一种名为NK-CAR-iPSC-NK细胞,可以说是物美价廉,不仅...
car-nk细胞构建流程 1.确定目标基因:通过文献研究或基因组测序技术,选取感兴趣的基因作为目标。 2.设计引物:根据目标基因的序列设计合适的引物,通常需要设计两对引物,分别用于扩增目标基因的两段特定区域。 3. PCR扩增:使用设计的引物进行PCR扩增,得到目标基因的DNA片段。 4.克隆目标基因:将PCR扩增得到的目标基因...
NK细胞的体内扩增也需要体内施用IL-2,具有显著的毒性作用。在CAR-NK细胞的构建中加入细胞因子转基因(如IL-2 和 IL-15)具有改善扩增效率和持久性的潜力 [28]。 (2)其次,血液中数量有限的NK细胞需要离体扩增技术,以便在收获后使用单采术获得必要的剂量。已...
到目前为止,唯一公布的CAR-NK临床试验采用了第二代CAR-NK构建,该构建通过加入IL-15表达和诱导Caspase9增强活性。 目前大多数CAR结构依赖于CD3ζ链信号域,强烈的激活信号对于诱导有效的抗肿瘤反应很重要,但也可能导致效应细胞的快速衰竭。因此,共刺激域的组合可用于校准所需的免疫细胞反应。与基于4-1BB的 CARs相比,...
铰链区,是CAR的细胞外结构区,连接ScFv和跨膜结构域。铰链区通常维持效应细胞中CAR表达和活性所需的稳定性。铰链区也提供了灵活性,以允许容易地接触到目标抗原。大多数CAR-NK结构使用CD8 α或CD28胞外域或IgG为基础的铰链的衍生物(图2)。 图2. CAR-NK构建中最常用的铰链区 ...
1. NK细胞的分离和培养: 从外周血、脐带血或其他来源中分离出NK细胞。 使用特定的培养基和细胞因子,如IL-2、IL-15等,培养和扩增NK细胞。 2. CAR基因的构建: 设计和合成针对特定靶点的CAR基因。 CAR基因通常包含抗原识别结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。 3. CAR基因的转导: 使用病毒载体(如慢病毒...
CAR-NK是加强版的NK细胞,是指将NK细胞经过嵌合抗原受体(CAR)基因修饰,赋予NK细胞靶向识别肿瘤细胞的能力,经过体外扩展后注入人体从而达到肿瘤治疗的效果。嵌合抗原受体能显著提高NK细胞疗效特异性,这个思路和CAR-T的构建类似。 CAR-NK细胞制备及作用机制CAR结构包括胞外的识别结构域用来识别肿瘤特异性抗原,一个跨膜结...
尽管过继性NK细胞治疗取得了显著的成功,但免疫细胞耗竭仍然是一个治疗障碍。为了构建下一代的CAR-NK,NK细胞基础生物学也正在努力,以确定NK细胞免疫功能的负调节因子。已经发现一些检查点受体如PD-1、LAG-3、TIM-3、TIGIT以及KLRG1在耗竭的NK细胞中表达上调。
构建CAR-NK是为通过基因编辑新建一条活化NK细胞的激活通路并增强其抗肿瘤效应，且兼具靶向性(如CD19, CD20)。基因的稳定转染是实现NK细胞稳定表达CAR的前提。NK细胞使用传统的电穿孔法和脂质体转染效率低下，因此多数使用逆转录病毒和慢病毒载体。CAR-NK制备工艺复杂，过程中的无菌操作、细胞纯度、制备成品安全性等...