首先，将保存在低温环境中的Calcein-AM溶液（2 mM）和PI溶液（2 mM）搁置至室温。随后，取出5l Calcein-AM溶液（2 mM）和12.5l PI溶液（2 mM），并加入到含有5ml pH值为7.4得1倍PBS缓冲液中。将混合液彻底混匀。这一步骤完成后，得到的工作液中，Calcein-AM的浓度为2M，而PI的浓度为5M。2、染色 首先...
使用Calcein-AM和PI进行染色的步骤如下：首先，将细胞接种至96孔板中，并按照实验需求进行处理。随后，移除原有培养基，用PBS洗涤一遍。接着，将Calcein-AM和PI染色液稀释至1X浓度，并向96孔板中加入100μL染色液。在37℃培养箱中孵育30分钟后，用荧光显微镜观察染色结果。Calcein呈现绿色荧光，PI呈现红色荧光，而Ho...
染色过程首先，在96孔板中以每孔约10^4个细胞的数量接种细胞。随后，向每孔中加入Calcein-AM的工作液（通常使终浓度达到2 µM），并孵育30分钟。之后，再向每孔中添加PI（使终浓度达到4 µg/mL），继续孵育5-10分钟。观察与拍摄在荧光显微镜下观察并拍摄染色后的细胞。此时，Calcein-AM发出明亮的绿色荧光，...
Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein-AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein-AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光(激发: 490 nm,发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序...
1)将Calcein-AM 储备液和 PI 储备液放置于室温。 2)2 µl Calcein-AM 储备液和 9 µl PI 储备液至 4ml PBS 中配制成染色溶液。Calcein-AM 的终浓度为 2 µmol/l,PI的终浓度为 4.5 µmol/l。 2.细胞染色 1) 染色 HeLa 细胞等贴壁细胞时,先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞,制备成细胞悬液。
由于死细胞缺乏酯酶,Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此,Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用,同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙 啶(Propidium iodide,PI)不能穿过活细胞的细胞膜,仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并 嵌入细胞的 DNA 双螺旋从...
Calcein-AM/PI,活细胞/死细胞双染试剂盒染色方案: 1、制备1mM Calcein AM储备溶液。将200μL二甲基亚砜加入含有200μg Calcein AM粉末的试管中,并使用移液管涡旋溶解。将溶液储存在避光的地方,并尽快使用,以避免重复的冻融循环。 2、使用前将Calcein AM储备溶液和PI储备溶液置于室温。使用PBS制备工作溶液。
细胞毒性检测法(Calcein-AM/PI双染法)是一种常用的细胞活力和毒性评估方法。其原理基于细胞膜的完整性和代谢活性两个关键指标。在实验中,通过使用两种荧光染料Calcein-AM和PI(Propidium Iodide),可以快速准确地评估细胞的状态。 Calcein-AM是一种脂溶性的非荧光染料,可以穿过完整的细胞膜进入细胞内部。在细胞内,Calcei...
Calcein,AM/PI活死细胞双染步骤👇🏻以HeLa 细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度,有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。 1.染色溶液的配制 1)将C...
Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒使用方法：以 HeLa 细胞染色为例，请注意不同的细胞种类、不同浓度，有不同的观察条件。1. 染色工作液的配制 添加 2.5 µl Calcein-AM 储备液（4mM）和 12.5 µl PI（2mM）储备液至 5 ml PBS 中配制成染色溶液。Calcein-AM的终浓度为 2 µM，PI 的终...