5. 但该法的培养时间较长,需要10-12天,一方面是为了获得更多的BMDC,另一方面,大多数粒细胞和淋巴细胞很难存活这么长时间,因此可提高最终获得的BMDC 的纯度; 6. 该法仅用GM-CSF 进行诱导培养,得到的BMDC中未成熟和成熟DC均有,若要进一步提高成熟度,需用LPS或TNF-α再诱导1-2天,其中成熟DC细胞的含量将达到50...
研究显示,GM-CSF+IL-4 联合诱导比GM-CSF 单独诱导产生的BMDC 表达更高的MHC II 类分子和共刺激分子CD80 和CD86 等,提示前者具有更强的抗原递呈能力,而且前者在混合淋巴细胞反应中表现出更有效的刺激能力。在动物实验中也发现,GM-CSF+IL-4 联合诱导的BMDC 可产生保护性抗肿瘤免疫反应,而GM-CSF 单独诱导的BMDC...
将骨髓细胞以1×10^6/mL的密度接种到无菌的培养瓶中,加入GM-CSF和IL-4,使其终浓度分别为50ng/mL和20ng/mL。 将培养瓶置于37℃,5%CO2的培养箱中,每两天更换一次培养基。 3. BMDC的成熟: 在BMDC培养的第5天,用GM-CSF和IL-4继续诱导BMDC的成熟。此时,GM-CSF的浓度可以降低至25ng/mL,而IL-4的浓度可...
2.2 铺至24 孔培养板内,每孔1ml 细胞,同时加入重组小鼠GM-CSF (20ng/ml)和IL-4 (10ng/ml),37℃,5% CO2培养箱培养,此为培养的第0天; 【注】: 1) 一般一只小鼠大约可收获4-5x107个骨髓细胞,所以可以铺至少40-50个24 孔板板孔。 2)GM-CSF 和IL-4 的使用浓度区间分别为20-50ng/ml 和10-40ng...
1. 小鼠品系和性别:目前培养 BMDC 用的比较多的小鼠是雌性或雄性 C57BL/6 小鼠。 2. 单独使用 GM-CSF 还是联合使用 IL-4? GM-CSF+IL-4 联合诱导的 BMDC 的成熟度高于 GM-CSF 单独诱导的 BMDC。 3. 成熟诱导剂的选择: LPS 和 CD40L 均是 DC 体外完全成熟的强诱导剂,CD40L 诱导成熟的 BMDC 在体内显...
1. 小鼠品系和性别:目前培养 BMDC 用的比较多的小鼠是雌性或雄性 C57BL/6 小鼠。 2. 单独使用 GM-CSF 还是联合使用 IL-4?GM-CSF+IL-4 联合诱导的 BMDC 的成熟度高于 GM-CSF 单独诱导的 BMDC。 3. 成熟诱导剂的选择:LPS 和 CD40L 均是 DC 体外完全成熟的强诱导剂,CD40L 诱导成熟的 BMDC 在体内显示...
3. Inaba原法仅用GM-CSF来诱导BMDC的产生,虽然得到的BMDC在混合淋巴 细胞反应中有较强的刺激能力,但DC的成熟度不及GM+IL-4的联合诱导,所以后来的改良法中多用GM+IL-4联合诱导。 ¾ 培养步骤: 1. 小鼠骨髓细胞的获得 1.1 小鼠(6-10周龄)颈椎脱臼法处死,手术取出所有股骨(femurs)和胫骨(tibias),并剪刀和...
Inaba法的改良简化了淋巴细胞去除步骤，通过氯化铵红细胞裂解液处理小鼠骨髓，随后加入GM-CSF（20ng/ml）和IL-4（10ng/ml）诱导分化。培养过程中，重要的是定期更换培养液，以确保细胞活力。悬浮和贴壁细胞的收集，标志着BMDC的初步形成。【制备步骤详解】首先，将PMI 1640培养液中调整细胞密度至1x10^6...
3.1 步骤2.4中收集的 BMDC,重新铺板,并向培养体系中加入重组小鼠GM-CSF(1000 U/ml)和 IL-4(1000 U/ml),以及 LPS(1-10μg/ml) 3.2 37℃,5% CO2培养箱培养 2 天,获得成熟的BMDC。 【BMDC大量制备法】-Lutz法[8] ¾ 背景: 1. Lutz法与Son法相似,均可大量制备BMDC,但与Son 法相比,Lutz法更为广...
2️⃣ 接着,准备培养基:DMEM培养基中加入20%血清和3%双抗,分别添加DC培养所需的gm-CSF和IL4(各20ng/ml),以及巨噬细胞培养所需的m-CSF(20ng/ml)。3️⃣ 将骨髓细胞从酒精和PBS中取出,剪去两端,用PBS或空培冲洗骨髓。4️⃣ 取干净的细胞,离心1000r/3min。5️⃣ 将细胞加入六孔板中进行...