BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与原始序列比对,统计甲基化位点及数量,并分析甲基化程度。
5.采用改良的亚硫氢酸钠修饰测序方法(Bisulfite Sequencing PCR),对早实枳不同发育阶段LFY基因CpG岛区域和非CpG岛区域 …cdmd.cnki.com.cn|基于2个网页 2. 亚硫酸氢钠测序法 亚硫酸氢钠测序法,bisulfite... ... ) bisulfite sequencing PCR 亚硫酸氢钠测序法 ) sodium hydrogen sulfite 亚硫酸氢钠法 ... ...
目前，基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（MSP）和硫化测序PCR（BSP）。亚硫酸氢钠处理DNA后，DNA双链中的“C”转化为“U”，随后的PCR中，“U”转化为“T”，但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生这种转化。因此，根据经亚硫酸氢盐处理的DNA...
之前文章讲到CpG岛的预测,那如果找到CpG岛后需要检测对应区域的甲基化状态,检测甲基化状态的方法比较多,目前被认为金标准的是亚硫酸盐的测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)。 BSP原理 用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被...
使用Promega的T-easy连接试剂盒，将PCR产物与T载体连接，然后转化大肠杆菌感受态细胞。转化后，通过蓝白斑筛选法来选取重组克隆。具体操作包括涂板、划种于新板、孵箱过夜，然后联系测序公司进行测序。以上步骤是全基因组Bisulfite Sequencing的基本流程，每一步都需要仔细操作，确保实验的准确性和可靠性。
亚硫酸氢钠测序法（bisulfite genomic sequencing）是直接测序法的基础，进一步深入研究CpG岛各个位点的甲基化情况。该方法通过重亚硫酸盐使未甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，进行PCR扩增后，对产物测序并与原始序列对比，从而判断CpG位点是否发生甲基化。这种方法具有高度可靠...
亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法, 其原理为:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧***(C)被转化为尿嘧***(U)而甲基化的胞嘧***则不变。 基因组DNA经亚硫酸盐处理后,设计BSP引物扩增目的片段,此时尿嘧***(U)全部转化为胸腺嘧***(T)...
Comparison of bisulfite sequencing PCR with pyrosequencing for measur- ing differences in DNA methylation. Anal Biochem 2010; 397(1):96-106.Reed K, Poulin ML, Yan L, Parissenti AM: Comparison of bisulfite sequencing PCR with pyrosequencing for measuring differences in DNA methylation. Anal ...
dna经亚硫酸氢盐硫化处理后dna双链中的c转化为u通过随后的pcr将u转化为t但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的dna的c发生上述转化因此根据经亚硫酸氢盐处理的dna模板设计引物时先输入感兴趣的dna序列程序将会显示2种序列 Bisulfite Sequencing 1. General Information As the first discovered mark, DNA methylation ...
2.2.1.2.1Bisulfite Sequencing PCR BisulfitesequencingPCR(BSP), which is regarded as the “gold standard” ofDNA methylationanalysis, is an unbiased and sensitive alternative to the use ofrestriction enzymes. This method combines thebisulfitetreatment of genomic DNA with PCR amplification and sequencing...