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Bisulfite Sequencing PCR，BSP是指BSP克隆测序法。BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测...
亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法, 其原理为:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧***(C)被转化为尿嘧***(U)而甲基化的胞嘧***则不变。 基因组DNA经亚硫酸盐处理后,设计BSP引物扩增目的片段,此时尿嘧***(U)全部转化为胸腺嘧***(T)...
BSP克隆测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP) ***BSP实验原理:*** BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与...
之前文章讲到CpG岛的预测,那如果找到CpG岛后需要检测对应区域的甲基化状态,检测甲基化状态的方法比较多,目前被认为金标准的是亚硫酸盐的测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)。 BSP原理 用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被...
BisulfiteSequencingPCR，BSP是指BSP克隆测序法。BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。
BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与原始序列比对,统计甲基化位点及数量,并分析甲基化程度。
亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing)直接测序法是建立在MSP基础上进一步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法。重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最...
目前, 基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术,分为甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)和硫化测序PCR(Bisulfite sequencing PCR, BSP)。技术原理:DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“...
Reduced Representation Bisulfite Sequencing(RRBS)是一种准确、高效、经济的DNA甲基化研究方法,通过酶切富集启动子及CpG岛区域,并进行Bisulfite测序,同时实现DNA甲基化状态检测的高分辨率和测序数据的高利用率。DNA甲基化研究一直是疾病研究的热点,与基因表达、表型性状息息相关。RRBS作为一种高性价比的甲基化研究方法,在...