目前，基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（MSP）和硫化测序PCR（BSP）。亚硫酸氢钠处理DNA后，DNA双链中的“C”转化为“U”，随后的PCR中，“U”转化为“T”，但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生这种转化。因此，根据经亚硫酸氢盐处理的DNA...
可以使用凝胶PCR产物回收试剂盒进行纯化，比如TIANGEN的产品。根据说明书操作，注意电泳时使用新配的电泳液，回收时要切取目的片段所在位置的凝胶，避免DNA损伤，并在-20℃保存回收后的DNA。4. PCR产物与T载体的连接和转化、蓝白斑筛选 使用Promega的T-easy连接试剂盒，将PCR产物与T载体连接，然后转化大肠...
之前文章讲到CpG岛的预测,那如果找到CpG岛后需要检测对应区域的甲基化状态,检测甲基化状态的方法比较多,目前被认为金标准的是亚硫酸盐的测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)。 BSP原理 用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被...
BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与原始序列比对,统计甲基化位点及数量,并分析甲基化程度。
亚硫酸氢钠测序法（bisulfite genomic sequencing）是直接测序法的基础，进一步深入研究CpG岛各个位点的甲基化情况。该方法通过重亚硫酸盐使未甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，进行PCR扩增后，对产物测序并与原始序列对比，从而判断CpG位点是否发生甲基化。这种方法具有高度可靠...
亚硫酸氢盐。DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列...
BisulfiteSequencingPCR，BSP是指BSP克隆测序法。BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。
Bisulfite-PCR-SSCP：是甲基化敏感性单链构象分析（MS-SSCA）的另一个称呼，由Maekawa等在1999年将重亚硫酸盐转化和PCRSSCP技术结合起来用于甲基化分析，并认为该法可用于多个标本的甲基化状态的鉴定、甲基化差异的定量和扩增的DNA片段中甲基化杂合性的检测。重亚硫酸盐使DNA中的未甲基化的CU，而甲基化的C则...
BSP克隆测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP) ***BSP实验原理:*** BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与...
目前,基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（MethylationspecificPCR,...