Bisulfite(硫酸氢盐)能够将基因组中未发生甲基化的C碱基转换成U,在经过PCR扩增后,这些位点会转变为T。那么,经过这样的处理后,与未加Bisulfite的样品相比,甲基化水平会发生怎样的变化? A. 基因组的甲基化水平不变 B. 基因组的甲基化水平明显下降 C. 基因组的甲基化水平明显提高 D. 不好说 ...
Bisulfite测序法的PCR引物设计要点包括( )。A.引物序列内不包括任何CpG位点B.引物序列内包括非CpG位点的CC.扩增片段覆盖感兴趣的整个CpG岛区段D.引
之前文章讲到CpG岛的预测,那如果找到CpG岛后需要检测对应区域的甲基化状态,检测甲基化状态的方法比较多,目前被认为金标准的是亚硫酸盐的测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)。 BSP原理 用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被...
BisulfiteSequencingPCR，BSP是指BSP克隆测序法。BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。...
Bisulfite Sequencing PCR，BSP是指BSP克隆测序法。BSP实验原理：BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测...
BSP克隆测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP) ***BSP实验原理:*** BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与...
亚硫酸氢盐。DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列...
亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing) 直接测序法是建立在MSP基础上进一步深入研究CpG岛各个位点甲基化情况的方法.重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增(引物设计时尽量避免。
BSP克隆测序法,是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后再CpG岛两端设计引物进行PCR,将目的产物纯化后进行TA克隆,每个克隆挑取阳性克隆测序,最后将测得的序列与原始序列比对,统计甲基化位点及数量,并分析甲基化程度。
目前,基因的甲基化研究主要结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术，分为甲基化特异性PCR（MethylationspecificPCR,...