步骤一:准备A/B混合液 首先,你需要准备A/B混合液,比例是A:B = 50:1。根据你的样品数量来决定最终体积,每个孔需要180ul的混合液。 步骤二:准备96孔板 在96孔板中进行标准曲线和蛋白样品浓度的测定。标准曲线的加样方法如下: 20ul水 + 0ul BSA 19ul水 + 1ul BSA 18ul水 + 2ul BSA 16ul水 + 4ul...
下面是bca法测蛋白浓度步骤: 1. 标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂 ; 2. 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀; 3. 各孔加入200μL BCA工作液; 4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec,37℃放置30分钟,然后在562nm下比色测定。以蛋白含量(μg)为...
BCA是一种碱性的水溶性复合物,在其提供的碱性环境下,蛋白质可以将BCA试剂中的Cu2+还原为Cu+,Cu+继而与BCA试剂螯合,从而产生蓝紫色的络合物,在562nm波长处具有强吸收峰,通过测定吸光度,结合标准曲线即可得知蛋白质浓度。 二、实验步骤(看试剂盒而定): 收集细胞并裂解,低温高速离心后取上清,记录上清体积; 配置BCA...
下面是BCA测蛋白的具体操作步骤: 1.准备试剂:BCA试剂盒包括BCA试剂A和BCA试剂B。按照说明书中的比例将BCA试剂A与BCA试剂B混合,均匀搅拌溶解。 2.预热样品:将待测样品放在37℃的水浴中恒温预热15-30分钟,以保证样品中各种蛋白质的完全溶解。 3.准备标准曲线:将BCA试剂A加入不同已知浓度的蛋白标准溶液中,将每个...
本视频介绍了WB实验中非常重要的一步,BCA蛋白浓度测定,包括文字版步骤说明以及详细的实操演示,标准品浓度梯度递减等,快来学习吧
二、 实验步骤(视试剂盒而定) 1) 蛋白标准品配制 室温完全溶解蛋白标准品,取20µl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1.0 mg/ml。 2) 配制BSA标准测定溶液 3) 工作液配制 将A液与B液按照50:1的比例混合,配成BCA工作液,并混匀。注:此处一定要精准计算待测孔所用工作液的量...
📝 步骤(视试剂盒而定): 1️⃣ 蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取20µl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1.0 mg/ml。 2️⃣ 配制BSA标准测定溶液。 3️⃣ 工作液配制:将A液与B液按照50:1的比例混合,配成BCA工作液,并混匀。
在碱性条件下,BCA工作液与蛋白质结合时,蛋白质将二价铜离子还原为一价铜离子,一个一价铜离子螯合两个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿变成紫色,在562nM处有高的光吸收值,并与蛋白质浓度成正比,据此绘制标准曲线,检测蛋白的OD值,即可得到浓度值。 bca法测蛋白浓度步骤步骤...
先把标准蛋白溶液稀释成一系列不同浓度的溶液,这就跟咱做饭要掌握好各种食材的比例一样重要。然后呢,把这些稀释好的标准蛋白溶液和待测样品都加到96孔板里,就好像把食材依次放进锅里。 接着,加入那神奇的bca工作液,就像给菜肴撒上调料一样,然后轻轻晃匀,让它们充分融合。这时候,就把板子放进37度的“烤箱”里...
BCA蛋白定量的方法是基于双缩脲反应,即在碱性溶液中,蛋白将二价Cu2+还原为一价Cu+, 一价Cu+被BCA溶液中二辛可宁酸(Bicinchoninic acid)螯合,生成紫色复合物,该复合物在562nm处具有强吸收峰。 组分 *Millipore旗下Novagen的BCA试剂盒可测定蛋白质浓度范围为20–2000 µg/...