本视频介绍了WB实验中非常重要的一步,BCA蛋白浓度测定,包括文字版步骤说明以及详细的实操演示,标准品浓度梯度递减等,快来学习吧
下面是BCA测蛋白的具体操作步骤: 1.准备试剂:BCA试剂盒包括BCA试剂A和BCA试剂B。按照说明书中的比例将BCA试剂A与BCA试剂B混合,均匀搅拌溶解。 2.预热样品:将待测样品放在37℃的水浴中恒温预热15-30分钟,以保证样品中各种蛋白质的完全溶解。 3.准备标准曲线:将BCA试剂A加入不同已知浓度的蛋白标准溶液中,将每个...
1) 蛋白标准品配制 室温完全溶解蛋白标准品,取20µl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液用PBS溶液稀释至100µl,使其终浓度为1.0 mg/ml。 2) 配制BSA标准测定溶液 3) 工作液配制 将A液与B液按照50:1的比例混合,配成BCA工作液,并混匀。注:此处一定要精准计算待测孔所用工作液的量,如测定4个蛋白样本,均做3个复...
8、参照标准曲线,根据各蛋白样品校正后的吸光度计算蛋白浓度。 9、根据稀释度和样品体积来计算原始样品中蛋白含量。 除了使用酶标仪和96孔板进行BCA测定,也可以使用分光光度计进行标准定量需要大量的蛋白质样品(50 µl):BCA工作液与蛋白质样品的比例为20:1,因此干扰物质的影...
BCA法测蛋白浓度步骤和注意事项。#热门 #实验 #科研 #干货分享 #sci @DOU+小助手 - Sci宝藏女孩⭐️于20240524发布在抖音,已经收获了8.6万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
🔹2)富集靶标蛋白 ①选择合适的裂解液。 ②超声破碎处理。 🔹3)低温环境 ①样本在制备过程中,始终置于冰上 。 🔹4)蛋白变性 ①蛋白95℃变性5-10min。 ②多次跨膜蛋白,建议不煮样。 🔹5)浓度测定 ①通过Bradfard分析、Lowry分析或BCA分析测定样本蛋白浓度。
BCA法测蛋白浓度步骤和注意事项。#热门 #实验 #科研 #干货分享 #sci @DOU+小助手 - SCI 宝藏女孩⭐️于20240524发布在抖音,已经收获了90个喜欢,来抖音,记录美好生活!
常用的测定方法包括双缩脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白浓度检测法等。其中最常用的方法就是BCA法(二辛可酸法或二喹啉甲酸法)。BCA 全称是Bicinchoninic Acid Assay, 也叫Smith Assay,这个方法是由Paul K. Smith 发明的。这个方法通过展示不同浓度样品的颜色变化来判断蛋白的浓度。
实验步骤 一、配制标准品和工作液 1. 配制 BSA 标准品体系(线性范围 20-2000 μg/mL 或者 5-250μg /mL 标准品制备各 2 种配置方法,请根据习惯选用恰当方式)。【注】:BSA 标准品浓度为 2 mg/mL,稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋 白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用水或 1 X...