Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统可以快速、高效的制备重组杆状病毒，该系统依赖一个位点特异性的转座将一...
其基本原理为:将一个改造后的AcNPV基因组转化入大肠杆菌,使它像普通质粒一样能在细菌中复制(由于太大,只限单拷贝),将其称之为杆状病毒穿梭载体(baculovirusshuttle vector,又称病毒质粒baculovirusplasmid,将其首尾合写而成为Bacmid),通过位点特异性转座,在大肠杆菌内完成病毒基因组的重组。杆状病毒穿梭载体Bacmid含有细...
1)背景介绍 大肠杆菌表达系统是实验室进行蛋白纯化的基本系统,培养费用低,能高效地表达外源蛋白,缺点是不能进行蛋白表达后修饰。杆状病毒-昆虫细胞表达系统能利用昆虫细胞体系进行正确的蛋白后修饰,培养成本也较哺乳动物细胞低,杆状病毒启动子高效启动蛋白表达,并且能容下较大的外源基因组。 苜蓿银纹夜蛾多(核壳体)核型...
赛默飞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是一种高效的重组杆状病毒生产方法,适用于昆虫细胞中的表达测试。该系统依赖于特定位点转座生成重组杆状病毒,提供可靠的表达结果。了解更多,立即访问赛默飞官网。
利用 Bac-to-Bac系统构建重组杆状病毒时，首先将外源基因克隆到供体质粒pFastbac的多克隆位点上，然后用普通CaCl2法将供体质粒转化进含AcBac( bMON14272) 和辅助质粒pMON7124的大肠杆菌DH10Bac中，在辅助质粒提供的转座酶作用下，外源基因转座到AcBac多角体基因位点的LacZα片段上的mini att Tn7位点，通过蓝白斑筛选...
Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统可有效生成用于昆虫细胞表达检测的重组杆状病毒。该系统依赖于通过大肠杆菌位点特异性转位而不是昆虫细胞中的同源重组进行的重组杆状病毒生成。该系统具有以下特性: •节省时间的表达杆状病毒质粒:—凭借 Bac-to-Bac 系统,pFastBac 载体...
Bac-to-Bac的原理我就用一个图说一下吧。简单来说就是pFastBac供体质粒和感受态里的杆粒做同源重组,交换一下序列,也就是供体质粒pFastBac的Tn7和目的基因一起转座到了杆粒的Tn7位置。 这样,菌p鉴定可以从2方面下手: 鉴定杆粒有没有获得供体质粒pFastBac的Tn7和目的基因。
图示Bac-toBac系统:下图刻画了重组病毒的产生和目的基因的表达 实验轮廓: 流程:下图揭示了表达目的基因的一般步骤 1、pFastBac donor 质粒(步骤:目的基因的克隆)得到 2、pFastBac重组体 (转化至DN10Bac细胞(含有杆粒和helper)) 得到 3、含有重组杆粒的Ecoli细胞 (重新划线) 得到 4、验证过的含有重组杆粒的Ecoli细...
经验证的TOPO5分钟内快速克隆技术 我们的Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统提供了一种快速、强力、可靠的方法来制备重组杆状病毒,从而在昆虫细胞中表达感兴趣的基因