图1：ARMS-PCR的工作原理[1]ARMS-PCR产物的检测 1 琼脂糖凝胶电泳：取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过条带的位置来确定基因型。2 熔解曲线分析：ARMS-PCR体系中加入染料/探针，对PCR产物进行熔解曲线分析，根据熔解曲线的位置来确定基因型。3 实时荧光检测：采用TaqMan探针，通过分析荧光数据确认其基因型。
从ARMS-PCR的原理上来看,该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手: 1 优化引物设计:常见手段之一是引入超过一个错配碱基,通常在3’端的倒数第二或第三位,与末端错配碱基共同作用,使不互补的扩增产物显著降低;同时减少PC...
图3.四引物扩增阻滞突变系统PCR检测原理 通过琼脂糖凝胶电泳检测,如果样本是纯合的,则会扩增出两个长度的PCR产物:一个长序列(红色)和一个短序列(如果是野生型则为黄色,如果是突变型则为橙色);如果样本是杂合的,将扩增出上述三种长度的 PCR 产物。 由于凝胶电泳检测时间较长,而且开盖进行产物分析易造成污染,因此...
ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR( Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR),又称为等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR),通过引物3’末端引物设计控制等位基因特异性延伸,并结合Taqman探针的方法检测荧光信号值,从而判断野生型等位基因和突变型野生基因...
从ARMS-PCR的原理上来看,该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手: 1 优化引物设计:常见手段之一是引入超过一个错配碱基,通常在3’端的倒数第二或第三位,与末端错配碱基共同作用,使不互补的扩增产物显著降低;同时减少PCR扩增的循环数,因为循环数增加会增加假阳性结果的几率。 2 调...
图2 Tetra-Primer ARMS-PCR反应原理 2. 引入错配碱基 为了提高引物延伸的特异性,可在3’端倒数第2位或第3位碱基处引入一个错配碱基,该错配碱基与3’末端的错配碱基共同作用,使引物在与其3’末端不互补的模板中扩增产物率显著降低,而引物在与其3’末端互补的模板中正常扩增,引物的错配碱基类型取决于3’末端碱...
图1:ARMS-PCR的工作原理[1] ARMS-PCR产物的检测 1 琼脂糖凝胶电泳:取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过条带的位置来确定基因型。 2 熔解曲线分析:ARMS-PCR体系中加入染料/探针,对PCR产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的位置来确定基因型。 3 实时荧光检测:采用TaqMan探针,通过分析荧光数据确认其基因型。目前...
ARMS-PCR的高特异性要求 从ARMS-PCR的原理上来看,该检测方法对PCR体系的特异性要求较高。保证特异性可以从以下两方面着手: 1 优化引物设计:常见手段之一是引入超过一个错配碱基,通常在3’端的倒数第二或第三位,与末端错配碱基共同作用,使不互补的扩增产物显著降低;同时减少PCR扩增的循环数,因为循环数增加会增加...
ARMS-PCR扩增阻滞突变系统PCR （Amplification Refractory Mutation System PCR，ARMS-PCR），又称为等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR）是Newton等首先建立用来检测已知突变的方法。ARMS基本原理如果引物的3′端碱基与模板碱基不互补，则用一般耐热DNA聚合酶无法延伸。因此根据已知点突变设计2条引物，其3′...