熔解曲线分析：ARMS-PCR体系中加入染料/探针，对PCR产物进行熔解曲线分析，根据熔解曲线的位置来确定基因型。3 实时荧光检测：采用TaqMan探针，通过分析荧光数据确认其基因型。目前市场主流即为该检测方式（ARMS-qPCR）。ARMS-PCR是遗传病诊断最准确的技术工具之一，在癌症/遗传病筛查和靶向治疗领域也有着重要贡献。其主要...
ARMS-PCR产物的检测 1 琼脂糖凝胶电泳:取一定量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过条带的位置来确定基因型。 2 熔解曲线分析:ARMS-PCR体系中加入染料/探针,对PCR产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的位置来确定基因型。 3 实时荧光检测:采用TaqMan探针,通过分析荧光数据确...
目前PCR试剂盒开发主要采用TaqMan探针法（突变位点位于TaqMan探针上）和ARMS法（突变位点位于引物3’端），二者瑜亮之争，各有长短。TaqMan探针法具有成熟度高、特异性高等优点，但探针设计难度较大、背景信号较高，而低背景/高特异性的MGB-TaqMan探针更加昂贵，在超多重PCR体系开发方面效率和难度都较高。ARMS方法具有...
随着第三代PCR技术(数字PCR技术)的迅速发展,PCR技术整体市场占有率有望进一步提高。 目前PCR试剂盒开发主要采用TaqMan探针法(突变位点位于TaqMan探针上)和ARMS法(突变位点位于引物3’端),二者瑜亮之争,各有长短。TaqMan探针法具有成熟度高、特异性高...
近年来,我国分子诊断市场规模保持快速增长趋势,PCR技术是目前相对成熟且临床应用相对广泛的分子诊断技术,占整体分子诊断市场的50%以上。随着第三代PCR技术(数字PCR技术)的迅速发展,PCR技术整体市场占有率有望进一步提高。 目前PCR试剂盒开发主要采用TaqMan探针法(突变位点位于TaqMan探针上)和ARMS法(突变位点位于引物3’端...
ARMS-PCR法应用实例介绍 比如现在有两名女性肺腺癌患者,检测EGFR L858R突变后使用吉非替尼半年,现在想看看是否耐药,需针对EGFR T790M突变进行检测。 我们采用ARMS-PCR方法进行检测,首先设计一对针对T790M突变位点的特异性引物,外加一条TaqMan探针,然后加上mix混匀上qPCR检测即可。qPCR检测结果参考内参基因进行解读,通过...
熔解曲线分析:ARMS-PCR体系中加入染料/探针,对PCR产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线的位置来确定基因型。 3 实时荧光检测:采用TaqMan探针,通过分析荧光数据确认其基因型。目前市场主流即为该检测方式(ARMS-qPCR)。 ARMS-PCR是遗传病诊断最准确的技术工具之一,在癌症/遗传病筛查和靶向治疗领域也有着重要贡献。其主要优...
TaqMan系统有提供它自己的引物/探针设计软件,即来自于ABI的Primer Express 2.0,这一款软件是实时荧光PCR实验中应用最广发的Oligo设计程序,其可用于以TaqMan为探针标准的DNA PCR、RE-PCR、巢式PCR、等位基因特异的PCR、多重PCR的寡核苷酸设计。该软件有一个引物校验文件,可根据其Tm值、二级结构和形成引物二聚体的可能...
检测的引物设计结合了2D-PCR和 ARMS-PCR的原理:引物3′端的最后一个碱基带有标签,特异性识别野生型和突变型模板。为了提高扩增特异性,在带有标签的引物3ʹ端的前3-6个碱基处引入了人工错配碱基,同时检测张红设计3条不同的序列作为探针,分别用FAM、HEX和Alexa568标记。