Annexin V实验通常情况下细胞分群比较明显，设门其实不复杂——在FSC/SSC图上圈出目的细胞群，注意细胞碎片的位置，调整好补偿后画十字门，结合对照组微调十字门的位置。在FSC/SSC图上圈目的细胞群的时候要注意：有部分细胞可能会因为凋亡发生明显皱缩，FSC会比正常细胞小一些（图7左侧部分），这部分信号也要圈进来，...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。 2)再次需要考虑细胞是否自带荧光,因为感染病毒或...
4.取100ml的细胞悬液于5 ml流式管中,加入5ml Annexin V-FITC,轻轻混匀; 5.室温(20-25oC)避光孵育10min; 6.上机前5min加入10ml 碘化丙啶溶液,轻轻混匀; 7.上机前在反应管中补加400mlPBS重悬细胞, 避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。 一句话介绍我——B...
一步法 1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g 离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。 2.取 1~5 × 105重悬的细胞,300 ×g 离心 5 min,弃上清。用 PBS 洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer重悬细胞。
1、细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)检测的实验步骤: 细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)适用于:细胞未转染GFP或未使用红色药物。 1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,须把EDTA洗去,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色; 2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清; ...
Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。3，细胞悬液中加入...
摘要: 课程组面向本科生开设了利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡的实验项目。该实验加入化疗药物依托泊苷(简称VP-16)诱导Jurkat细胞发生凋亡,使用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,在荧光显微镜下拍照计数。实验结果表明:紫外光激发下,早期凋亡细胞呈现绿色荧光,而晚期凋亡细胞和坏死细胞呈现红色...
Annexin V-EGFP荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。 B. 流式细胞仪分析 用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。 Annexin V-EGFP的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光通过PI通道(FL2或FL3)检测,建议使用FL3。 荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去...