Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。3，细胞悬液中加入...
4.取100ml的细胞悬液于5 ml流式管中,加入5ml Annexin V-FITC,轻轻混匀; 5.室温(20-25oC)避光孵育10min; 6.上机前5min加入10ml 碘化丙啶溶液,轻轻混匀; 7.上机前在反应管中补加400mlPBS重悬细胞, 避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。 一句话介绍我——B...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
Annexin V-FITC溶液 碘化丙锭(PI)溶液 实验步骤 1.细胞收集:悬浮细胞直接收集到10ml的离心管中,500~1000r/min离心5min,弃去培养液。 2.用预冷,4℃无菌的PBS充分洗涤细胞两次,用250μ结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml。 3.取100μl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5μl Annexin V-FITC和10μ...
按实验方案诱导凋亡。用预冷PBS离心洗涤，收集1-10×105个细胞(包括培养上清中的细胞)。用双蒸水稀释5×Binding Buffer为1×工作液，取500 μl 1×Binding Buffer重悬细胞。每管加入5 μl Annexin V-FITC和10 μl PI。轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育5分钟。上机检测分析。在流式细胞仪上，通过FITC检测通道检测...
图1：Annexin V 检测原理 02 实验结果展示 图2：Annexin V-FITC/PI（E-CK-A211）实验结果展示 03实验中需要注意的细节 a. 样本制备方面：（1）贴壁细胞要尽量使用不含EDTA的胰酶进行消化。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后，要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA。（2）比较难消化的细胞、组织等样本，可以分...
Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡实验方法 1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300×g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。2.取1~5×105重悬的细胞，300×g离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入100 μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。3.细胞悬液...
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验方法分为以下步骤：收集细胞，预冷洗涤，离心去除上清液，加入结合缓冲液，混合后加入Annexin V-FITC与PI，室温避光孵育，最后通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。实验过程中需注意Annexin V-FITC与PI的低温避光储存，PI的毒性防护，以及细胞密度、细胞消化时间、检测时间等...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α...
1、细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)检测的实验步骤: 细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)适用于:细胞未转染GFP或未使用红色药物。 1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,须把EDTA洗去,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色; 2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清; ...