Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
将Annexin V-FITC与PI联合使用，可以实现凋亡早期、凋亡晚期或者坏死细胞的区分。在流式细胞仪或荧光显微镜下观察，早期凋亡细胞由于细胞膜完整，PI无法进入，仅显示Annexin V-FITC的绿色荧光；而凋亡晚期或者坏死细胞由于细胞膜通透性增加，PI可以进入并与细胞核结合，同时Annexin V-FITC也能结合外翻的PS，因此这些细胞会...
Annexin-V为Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,对PS有极强的结合力。PI是一种经济、稳定的核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。 将Annexin V与PI联合使用时,PI被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC和PI结合染色呈现...
Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色;3使用流式细胞仪正确分析Annexin V-FITC/PI双染的细胞前要求仪器的荧光补偿来去除两种染料激发光之间的叠加。因为荧光补偿设置与PMT的电压直接相关,所以不同仪器之间的补偿不同。建议在实验开始阶段分析经Annexin V、PI分别单染的细胞来调整荧光补偿去除光谱重叠。根据未...
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...
一、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法 原理:在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。
一、原理 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin V进行荧光素(FITC、PE)或Biotin标记,以标记了的Annexin V作为荧光...
Annexin-V/PI实验结果 注意事项：1、检测贴壁细胞时，若不好控制消化时间，建议用Accutase细胞消化液，对细胞损伤小且不会改变细胞膜上PS的分布。2、选择Annexin-V的荧光染料时要考虑细胞的自发荧光，特别是培养时间久或药物处理的细胞，一定注意细胞代谢物药物本身的荧光，一般来说细胞代谢物的自发荧光会干扰FITC/PE...
一、检测原理 Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生 凋亡时,膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被荧光染料 FITC 标记的 Annexin V 结合,可 通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide,...
按实验方案诱导凋亡。用预冷PBS离心洗涤，收集1-10×105个细胞(包括培养上清中的细胞)。用双蒸水稀释5×Binding Buffer为1×工作液，取500 μl 1×Binding Buffer重悬细胞。每管加入5 μl Annexin V-FITC和10 μl PI。轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育5分钟。上机检测分析。在流式细胞仪上，通过FITC检测通道检测...