基因工程化的AAV能转导外源基因，借助特定启动子、光遗传学/化学遗传学元件、钙指示剂、神经递质探针或Cre/lox P，Flp／FRT重组酶技术，可选择性地标记特定的神经元。越来越多的神经环路研究使用AAV作为神经示踪工具。AAV血清型种类多，不同的血清型对神经元有不同的感染特性。神经科学研究中常用的 AAV 血清型有 ...
图4、rAAV2-retro(逆向非跨突触标记) (Tervo et al., Neuron, 2016) 可顺向跨单级突触的血清型 2017年张砺教授团队研究报道AAV1能在高滴度条件下呈顺向跨突触传播,与Cre依赖的报告系统相结合,可高效和特异性地驱动Cre依赖的外源基因在突触后神经元中的表达,以标记...
AAV-Cre; AAV-DIO过表达(光/化学遗传元件) AAV-CRISPR 运输和储存 对于长距离运输,应先将腺相关病毒载体保存在 -80℃,再采用全程干冰运输,以防滴度下降。 腺相关病毒载体在 -80℃保存 6 个月,滴度不会明显下降。建议保存 6 - 12 个月以上的样品,进行实验前,重新测一次滴度。应尽量避免反复冻融(小于 3 ...
1、可逆向示踪的血清型— AAV2-retro 常见的AAV病毒载体都是顺向标记，极少能进行逆行传递，这大大限...
载体：AAV-CaMKIIα-Cre-GFP &AAV-DIO-caspase-3 注射体积：两支病毒1:1混合注射100nl 观察时间：4周 1.5 海马、皮层&逆向非跨突触（rAAV2/retro）客户发表文章：Biological Psychiatry. (IF=11.984). Bing Xing Pan,et.al. (2018). Chronic stress causes projection-specific adaptation of amygdala ...
基于这一原理,研究人员也可以使用表达TVA的Cre依赖性AAV载体,结合Cre转基因动物实现特异性标记。 起始细胞类型特异性跨多级突触示踪 3 . 总结 在常用的逆行追踪工具中,AAV2-retro逆行感染具有脑区偏好性,更倾向于感染皮层神经元;N2cG-RV-ΔG只能广谱逆行标记投射网络,PARTS/cPARTS策略克服了上述缺点。在广谱标记...
此外,张砺教授团队还证实scAAV1-hSyn-Cre相比AAV1载体具有更优越的顺向跨突触标记能力,可在兴奋性、抑制性、神经调质和脑-脊髓等多种神经环路中有效、特异地标记单突触靶神经元及其输出,从而解析不同的功能/行为。 2. 逆向标记血清型— AAV2-retro
载体:AAV2/1-retro-Syn-eYFP-Cre、AAV2/8-CaMKIIα-DO-SK2&AAV2/8-CaMKIIα-DIO-SK2-mCherry 注射体积:300nl 观察时间:4周 1.6 初级运动皮层&顺向跨突触(rAAV2/1) Nature Neuroscience. (IF=19.912). Yao J,et.al. (2018). A corticopontine circuit for initiation of urination. [腺相关病毒, 神...
(C) 通过AAV2-Retro进行逆行标记。(D) 逆行表达AAV-Cre重组酶,限制了特定回路中神经元的表达。在光遗传、化学遗传、钙成像中将光感基因(如ChR2,NaHR3.0,Arch等)、DREADD(如hM3Dq、hM4Di等)和GCaMP系列蛋白通过AAV进行递送,而且大部分研究通过Cre-LoxP系统进行调控,极大提高了区域特异性以及在时间上的控制。
病毒滴度:rAAV2/1-Cre: 1.13E+13 VG/mL 注射体积:60nl 观察时间:4周 图片来源:Sci Adv. 2019 Feb 20;5(2):eaat3210. doi: 10.1126/sciadv.aat3210. 病毒滴度:rAAV2/8: 2.45E+12 VG/mL 注射体积:500nl 观察时间:6周 图片来源:Sci...