常见的 AAV 病毒载体都是顺向标记，极少能进行逆行传递，这大大限制了 AAV 载体在神经环路示踪中的应用。直到 2016 年，研究人员在 AAV2 的基础上，通过定向进化的方式改造出一种具有逆向示踪功能的 AAV2 突变体——AAV2-retro，该载体能够在小鼠大脑中进行有效的神经环路逆向标记，且其逆行示踪能力和效率与传统的...
在这样的背景下,AAV2-retro应运而生。2016年,发表在神经科学领域权威期刊Neuron上的文章,描述了这种AAV2-retro病毒的构建方法及其应用。 这种AAV具有非常高效的逆行标记能力,比一般的血清型的逆行标记能力高的多,甚至高于常用的逆行标记染料Fluoro-Gold(图...
直到 2016 年,研究人员在 AAV2 的基础上,通过定向进化的方式改造出一种具有逆向示踪功能的 AAV2 突变体——AAV2-retro,该载体能够在小鼠大脑中进行有效的神经环路逆向标记,且其逆行示踪能力和效率与传统的逆行示踪剂相当。下图所示为 rAAV2-retro 的开发过程及应用实例: rAAV2-retro(逆向非跨突触标记) (Tervo ...
CaMKIIa是组成CaMKII的主要亚基,在前脑中,CaMKIIa特异地表达在兴奋性神经元中,因此CaMKIIa启动子能作为兴奋性神经元特异性启动子。 研究人员开发了一种新的AAV变体,将AAV2-Retro的10-mer肽序列插入到AAV9的衣壳中,即AAV9-Retro衣壳,并将AAV-CaMKIIa-mCherry和AAV-CaMKIIa-EGFP载体包装AAV,通过小鼠颅内注射和静...
载体：AAV2/1-retro-Syn-eYFP-Cre、AAV2/8-CaMKIIα-DO-SK2&AAV2/8-CaMKIIα-DIO-SK2-mCherry 注射体积：300nl 观察时间：4周 1.6 初级运动皮层&顺向跨突触（rAAV2/1）Nature Neuroscience. (IF=19.912). Yao J,et.al. (2018). A corticopontine circuit for initiation of urination. [腺相关病毒...
图2. 基底脑桥核(BPN)注射AAV2-retro标记皮层-BPN环路 图3. 病毒对小鼠皮层、下丘脑、杏仁核等脑区的标记情况 另外,这种病毒展现出优秀的携带基因工具的能力,除了比较常规的表达目的基因以外,该病毒还可以结合一些热门的研究手段,例如双光子钙离子成像技术、CRISPR/Cas9基因编辑技术等等。因此,这种AAV的应用非常广泛...
病毒产品:维真生物-AAV(retro)-hSyn-GFP; 注射方法:局部注射小鼠脑室某区; 病毒滴度:4.77×10E13VG/mL; 注射量:100nL; 取材时间:注射后2周取材拍摄; 结果:病毒被轴突吸收,逆行到胞体,到达海马CA1区,得到了十分满意的实验结果 【维真生物-AAV病毒应用】注射位点 ...
rAAV2-retro通过逆行途径获得的转基因表达水平足以用于神经环路功能示踪,以及对神经元基因组的靶向操作。因此,通过选择性监测和操作连接不同脑区的投射神经元,rAAV2-retro有望为神经环路如何促进大脑发挥功能提供深入见解,并可能为神经退行性疾病的治疗干预奠定基础。
糖还可以显著提高载体产量。例如,细胞培养基中存在0.2M蔗糖已分别将AAV2和rAAV2-retro血清型的产量增加了1.9倍和1.5倍(见图5)。这可能是由于在严峻的下游纯化过程中蔗糖稳定AAV。有趣的是,蔗糖处理对AAV5产量没有影响。鉴于其广泛的可用性、低成本和易用性,A...
首先，我们来了解下AAV2-retro，一种具有逆向示踪功能的血清型。它在神经环路示踪中具有显著优势，能够在小鼠大脑中进行有效的神经环路逆向标记，其逆行示踪能力和效率与传统逆行示踪剂相当。这一血清型的开发过程及应用实例，展示了其在神经研究中的应用潜力。接着，让我们关注AAV1血清型。张砺教授团队的...