在该研究中,实验人员构建了AAV-EF1α-DIO-YPet-2a-mGFP-WPRE(BrainVTA包装)病毒,并通过将其注射到Tac1-Cre小鼠的l/vlPAG脑区中,实现了对Tac1神经元完整形态的特异性标记(图1)。 该病毒运用EF1α启动子和Cre依赖模式,串联表达了YPet (yellow fluorescent protein for energy t
但使用腺相关病毒(AAV),通过Flox小鼠注射AAV-Cre或者Cre小鼠注射AAV-LoxP的方式,周期短,成本低,时空特异性表达,可以极大的提高转基因小鼠模型的应用效率。 图2 TGFBI flox/flox小鼠注射AAV-Cre(AAV8-mCD68-Cre)应用案例 吉满生物提供的Cre AAV可以灵活、高效地结合Gene-floxed小鼠实现条件性敲除,免去Cre小鼠维系...
研究人员通过在老鼠视神经节细胞注射衣壳突变的AAV2携带CRE重组酶来构建组织特异性的Rosa26 (R26) 转基因小鼠,用来研究RGC退行性疾病以及视神经疾病。109的AAV病毒量就能够有效的感染鼠神经节细胞层神经元,并且可以持续表达长达11 weeks。 CRE的表达对RGC早期5 weeks内没有显著影响,但往后细胞会出现死亡。结果显示这...
Cre重组酶与HIV-TAT肽的简单共注射能够成功将Cre传递到小鼠神经细胞中,Cre的递送成功激活了大脑皮质中神经元和星形胶质细胞中报告基因的表达,而不会造成组织损伤,其转导效率与常用的腺相关病毒相当或更好。研究数据表明,传递肽介导了有效...
在rAAV-cap-in-cis-lox骨架内构建衣壳文库,并将病毒文库传递给特定细胞群中具有Cre酶表达的动物,该系统能够进行选择性扩增,恢复已转导靶序列的顺序。由于rAAV-cap-in-cis-lox基因组缺乏功能性rep基因,研究者将AAV2/9 Rep-Cap质粒进行了修改,通过在每个衣壳蛋白VP1-VP3的阅读框内插入终止密码子来终止衣壳蛋白的...
案例1:研究人员通过在老鼠视神经节细胞注射衣壳突变的AAV2携带CRE重组酶来构建组织特异性的Rosa26 (R26) 转基因小鼠,用来研究RGC退行性疾病以及视神经疾病。109的AAV病毒量就能够有效的感染鼠神经节细胞层神经元,并且可以持续表达长达11 weeks。 CRE的表达对RGC早期5 weeks内没有显著影响,但往后细胞会出现死亡。结果...
病毒编码序列的完全去除使重组AAV载体的包装能力达到最大化（包装容量为4.5 Kb），并且可以更好地保证它们在体内递送时的低免疫原性和细胞毒性。结合组织特异性启动子、多种报告基因、Cre重组酶等技术，重组AAV载体可以高效介导外源基因的特异性表达；此外通过携带光遗传学、化学遗传学、钙指示剂及神经递质荧光探针等...
南模生物利用AAV介导的Cre-flox系统构建了丰富的动物模型,部分验证数据如下: 小鼠肺癌模型 由气管雾化注射AAV-Cre病毒至KL小鼠(NM-CKO-234719)肺部,使Cre在小鼠肺部特异性表达,诱导Stk11表达缺失与Kras-G12D突变,可诱发肺癌发生。 小鼠PKD运动障碍模型
另一种方法是运用cre-loxp系统进行的敲除，前提是必须要有flox动物，再配合AAV-cre使用即可实现靶基因的敲除。11、需要对动物进行造模，什么时间注射AAV合适？AAV的表达高峰在注射后3-4周，然后结合动物造模的时间、注射AAV的目的来推算注射时机。比如AAV调控基因表达进而起治疗作用，则一般要把控AAV的表达高峰期与...
图7. Ikbkap基因敲除小鼠中，cre在有丝分裂后的神经元中表达 三、注射方式 AAV感染外周神经系统的注射方式包括原位注射和系统性注射。原位注射，即根据实验需要在特定的部位进行注射，更适合局部组织的研究。PNS缺乏很精确的坐标系，所以准确重复地靶向特定的神经节或周围神经中具有较强的挑战性，但目前已有研究人员将...