解析 PCR没有产物,首先确定加样是否准确,且各个试剂是否有降解或失效,如果均正确有可能是程序设置方面出现问题或退火温度过高.PCR产物呈片状应该是退火温度偏低,出现了较多的非特异条带,可适当提高退火温度.结果一 题目 想问两个问题1.PCR没有产物的原因是?2.PCR产物呈片状的原因是? 答案 PCR没有产物,首先确定加...
可能的原因: 1) RNA模板质量低或者cDNA模板质量低 2) 靶miRNA基因表达量低或者无表达,无法检测 3) 试剂中存在PCR抑制剂 4) PCR仪是否正常运转 5) PCR程序设置有无问题,如:循环数不够、无读板过程、无制作融解曲线的过程等 6) PCR过程所用试剂少加一种或多种,如,sybr、正反向引物、模板 7) PCR过程所用...
(2)苯酚:0.5%即可完全抑制PCR反应,0.2%可显著降低产量 (3)乙醇:大于1%的浓度可抑制PCR反应,但在某些体系里又能增加产量 (4)异丙醇:抑制作用比乙醇稍强 (5)乙酸钠:大于5mM时抑制PCR反应 (6)氯化钠:大于25mM时抑制PCR反应(生理盐水无影响) (7...
(七)引物:引物浓度一般为0.1~0.5μmol/L,浓度过高会引起错配和非特异扩增,浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15~30个碱基,引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对,末位碱基最好选用A、C、G(因T错配也能引发链的延伸)。 引物G C约占45~55%,碱基应尽量随机分布,避免嘧...
【答案】引物设计是否合理;模板是否合理;反应所用的酶因保存或运输不当而失活;检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符;Mg2+浓度不合适【解析】1. 引物检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解(建议用新合成的引物进行尝试);引物设计是否合理,可利用 BLAST检查引物特异性或重新设计引物(如果之前用...
1.Taq DNA聚合酶用Taq DNA聚合酶代替大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是使PCR普及应用的关键。Klenow片段不能耐受95℃的双链DNA变性温度,所以每次循环都要加入新酶;而Taq DNA聚合酶可以耐受93~95℃的高温,避免了不断补加多聚酶的繁琐操作,同时使退火和延伸温度得以提高,减少了非特异性产物和DNA二级结构对PCR 的...
9楼:Originally posted byKorea??at 2018-01-19 12:07:03 好
⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量:每条引物的浓度0....
iipcr产物结构图目的基因启动子终止子限制酶 i限制酶 ii针对训练-1:引物选择在核酸分子杂交技术中,常常使用已知序列的单链核酸片段作为探针.为了获得b链作探针(如图),可应用pcr技术进行扩增,应选择的引物种类是( )a.引物1与引物2 b.引物3与引物4c.引物2与引物3 d.引物1与引物4针对训练-2:引物选择为了对重...