解析 PCR没有产物,首先确定加样是否准确,且各个试剂是否有降解或失效,如果均正确有可能是程序设置方面出现问题或退火温度过高.PCR产物呈片状应该是退火温度偏低,出现了较多的非特异条带,可适当提高退火温度.结果一 题目 想问两个问题1.PCR没有产物的原因是?2.PCR产物呈片状的原因是? 答案 PCR没有产物,首先确定加...
可能的原因: 1) RNA模板质量低或者cDNA模板质量低 2) 靶miRNA基因表达量低或者无表达,无法检测 3) 试剂中存在PCR抑制剂 4) PCR仪是否正常运转 5) PCR程序设置有无问题,如:循环数不够、无读板过程、无制作融解曲线的过程等 6) PCR过程所用试剂少加一种或多种,如,sybr、正反向引物、模板 7) PCR过程所用...
PCR是个敏感的体系，做不出来很正常。我不知道楼主你为什么认为你另外5个样本应该一定可以扩出东西，难道你做了10组重复？你那些样品跟扩出来的比模板，引物，酶，退火温度，循环数等参数都是一样的？有时候就是这样，用同样的体系扩增同样的东西还会出现不同的结果，就看你用PCR做什么了，如果是验证...
缘由:1.模板不纯2.Buffer3.退火温度偏低4.酶量过多5.dNTP、Mg+度偏高循环次数过多对策:PCR适当降低模板或引物浓度适当削减酶量降低镁离子浓度适当提高退火温度或使用二阶段温度法削减循环次数问题3:拖尾6.循环次数过多对策:纯化模板更换Buffer适当提高退火温度适量用酶dNTP削减循环次数问题4:假阳性现象:空白比照消灭...
PCR就是聚合酶链式扩增反应，因为DNA是双链，扩增时就需要同时扩增两条链，需要设计上游和下游引物，同时扩增DNA双链因为引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补； 另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸...
5Marker 预期结果 如果是Smear带，说明所提基因组DNA的断裂现象严重。•思考题：1.实验中所用到的各试剂的作用是什么?氯仿,乙醇,EDTA2.DNA提取过程中应注意什么？凝胶成像系统：凝胶成像系统：实验二、PCR扩增特定基因片断 实验背景基本原理PCR操作引物设计注意事项PCR的应用 一．实验背景 ...
模板长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致 DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer,可以有效降低解链温度;模板为粗品,有可能是DNA未释放出来(若样本为植物叶片,要确保植物为非多糖多酚植物,取新鲜幼嫩的叶片,并将叶片面积剪小,如黄枪头尖部面积...
跑在最前面的带肯定是引物二聚体，可用TouchDown PCR试试，从55度降到45度，每次降一度，总共35个...
PCR检测法就是根据载体克隆位点两端的序列或目的DNA片段两端的序列,设计出一对特异的扩增引物,以转化生长的()为模板进行扩增,并用凝胶电泳检测PCR产物,如果电泳图谱上出现了与预期长度相符的扩增片段,则认为这个被检测的克隆可能就是含有目的DNA片段的重组子。A.基因组DNAB.细菌质粒DNAC.细菌蛋白质D.细菌RNA 免费查...