例如这里的Control组Ct值是:13.38、13.60和15.80时,我们选择用几何平均值: 4. 计算ΔΔCt值。用每个样品所得的ΔCt减去第三步的平均ΔCt。 5. 计算 2^-(∆∆Ct)值,即为每个基因的相对表达量 最后在统计分析的时候,直接使用 2^-(∆∆Ct)值进行分析可能不会呈现正态分布且偏态严重,这时候可以用log...
qPCR的相对定量计算方式，即2–∆∆Ct方法，由Kenneth Livak和Thomas Schmittgen于2001年提出并广泛应用。此方法在实时荧光定量PCR（qPCR）实验中，用于计算样品中特定基因相对于参考基因的相对表达量。荧光定量PCR实验中，仪器会根据扩增产物的荧光信号达到设定阈值的循环数来记录Ct值。Ct值的高低...
Livak法（也称为相对定量法或∆∆Ct法）是一种常用的实时荧光定量PCR（qPCR）数据分析方法，用于分析...
目的 探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate, S1P)、1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1-phosphate receptor 2, S1PR2)在急性主动脉夹层(acute aortic dissection, AAD)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC...
所有引物均由一家公司合成。使用以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdH)为参考基因的2−∆∆CT比较法进行相对表达分析,在分析的两种条件下,该参考基因表达稳定。结果以相对于对照组(即与未添加PDGF-BB培养的样品相比,设定为1)的倍数变化表示。 09. 统计分析...
PCR反应程序:95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s,60 ℃30s,45个循环。mRNA的相对转录量采用2-∆∆Ct方法计算,并以β⁃actin为内参基因。 1.5免疫组织化学检测 选取小鼠感染后第5 d试验的肺组织进行免疫组化。组织按常规方法制片,厚度4...
采用 Trizol 法提取 组织中的总 RNA,取 500 ng RNA 逆转录为 cDNA (Takara,RR036A);使用 TB green(Takara,RR420) 染料按照 10 μL 体系进行 45 次循环的扩增,引物序 列如表 1 所示 , 以 3- 磷酸甘油醛脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) 为内参,按 2−∆∆Ct 法分析.从...
FDX1 上游:CCTCTTTGGAGTCTCTCGCGG 下游:CAGCCCAACCGTGATCTGT DLD DLAT GAPDH 上游:CTCTTGCTTTGGAATATGGAGC 下游:AAAAGCTTCTGATAAGGTCGGA 上游:ACTCCCCAGCCTTTAGCTC 下游:CAATCCCTTTCTCTACTGCCAAC 上游:GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT 下游:GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG dehydrogenase,GAPDH)为内参按 2−∆∆Ct 法分析....
55°C退火30秒, 72°C延伸1分钟; 40个循环; 72°C 延伸10分钟.以18S rRNA作为对照, 所用引物序列 为 5′-CTTAGTTGGTGGAGCGATTTG-3′ 和 5′-CCT- GTTATTGCCTCAAACTTCC-3′, 退火温度为 58°C, 循环数为40.实验数据用MX3000P软件分析, 采用 2−∆∆Ct法分析基因相对表达量(Livak and Schmittg...