(8)标准缓冲液一般可保存2～3个月,但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时,不能继续使用。除另有规定外,水溶液的pH值应以玻璃电极为指示电极,用酸度计进行测定。酸度计应定期检定,使精密度和准确度符合要求。 关键字:NP40 Lysis Buffer with Glycerol,1X(含甘油NP40裂解液),1X;即用型溶液...
一直在用的细胞裂解液配方：25mM tris 150mM NaCl 1mM EDTA 1% NP-40 5% glycerol ...
俺前boss nature文章上的裂解液配方是:20mM Tris/HCl, pH7.6, 100mM NaCl, 20mM KCl, 1.5mM MgCl2, 0.5% NP-40 and protease inhibitors (20μg/ml leupeptin, 10μg/ml pepstatin A and 10 μg/ml aprotinin)(此裂解液可用于抽提核蛋白),其中蛋白酶抑制剂很复杂也很贵,其实用0.5mM PMSF替代这三种就...
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最为普遍应用的 2-DE 蛋白质溶解方法仍然是以下几种物质的混合液(所谓“裂解缓冲液"), 9.5 mol/L 尿素, 4% (m/V) 的 NP40 、 1%(m/V) 的还原剂二硫苏糖醇 (dithiothreitol, DTT) 以及 2% (m/V) 相应 pH 范围的SCA。该配方适用于许多类型的样品,但并不是一种万能方法,其中在膜蛋白质的提取上...
细胞裂解液: SDS ,NP-40 ,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。 SDS属于离子型去垢剂,*厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。 NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
(1)将细胞密度达到80%-90%的细胞取出放置在冰上,用冰箱拿出的1×pbs沿皿壁冲洗细胞3次,缓慢地注意不要将细胞冲起;向培养皿中总共加入300μl-500μl冰箱里预冷的np40裂解液,分两次加入,将细胞放置于冰上1-2min等待裂解,刮刀或者枪头刮下,吸到1.5ml的ep管中;在4℃冷库中剧烈的振荡,振荡时间分别为5min,...
1.1.1缓冲液配方 lysisbufferforco-ip(用于293ft细胞和jurkat细胞中的免疫共沉淀试验):50mmtris-hcl,ph7.4,155mmnacl,2mmedta,2mmna3vo4,20mmnaf,10mmiodoacetamide,0.5%np40,1mmpmsf,1mmdtt,completeproteaseinhibitorcocktail(sigma); lysisbufferforubiquitination(用于小鼠和人的活化的cd8+t细胞裂解,检测pd-1的泛...
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