(8)标准缓冲液一般可保存2～3个月,但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时,不能继续使用。除另有规定外,水溶液的pH值应以玻璃电极为指示电极,用酸度计进行测定。酸度计应定期检定,使精密度和准确度符合要求。 关键字:NP40 Lysis Buffer with Glycerol,1X(含甘油NP40裂解液),1X;即用型溶液...
细胞裂解液: SDS ,NP-40 ,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同。 SDS属于离子型去垢剂,*厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠。 NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
(1)将细胞密度达到80%-90%的细胞取出放置在冰上,用冰箱拿出的1×pbs沿皿壁冲洗细胞3次,缓慢地注意不要将细胞冲起;向培养皿中总共加入300μl-500μl冰箱里预冷的np40裂解液,分两次加入,将细胞放置于冰上1-2min等待裂解,刮刀或者枪头刮下,吸到1.5ml的ep管中;在4℃冷库中剧烈的振荡,振荡时间分别为5min,1...
√ 细胞组织裂解液的选择 裂解液是最普遍使用的蛋白提取试剂,可根据文献或经验自行配制,也可购买商业化的产品。常见的细胞裂解液有NP40、Triton X-100、RIPA buffer等。下表是根据目的蛋白的不同定位选择裂解液的建议。虽然裂解液的使用范围比较广泛,能够满足总蛋白的提取,但是无法做到特异蛋白的提取,特别是遇到低丰...
1.1.1缓冲液配方 lysisbufferforco-ip(用于293ft细胞和jurkat细胞中的免疫共沉淀试验):50mmtris-hcl,ph7.4,155mmnacl,2mmedta,2mmna3vo4,20mmnaf,10mmiodoacetamide,0.5%np40,1mmpmsf,1mmdtt,completeproteaseinhibitorcocktail(sigma); lysisbufferforubiquitination(用于小鼠和人的活化的cd8+t细胞裂解,检测pd-1的泛...
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这是标准配方: 裂解液:50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 但我个人的经验是:如果你裂解细菌是为了提取蛋白的话,而且蛋白的分子量又小于20kd的话,尽量减少溶菌酶的用量,会引入溶菌酶这种杂蛋白.一般配60ml裂解液...
[0090] GST-A液配方:20mM Tris-HCl ρΗ7·9+20%甘油+ImM EDTA+0.5mM MgCl2+0.1 %NP40,使用时再加入0.3mM benzamidine+O.lmM PMSF+lmM DTT+20yg/mL溶菌酶(以上个组分浓度均为终浓度)。 [0091] (6)大探头,冰浴,超声破碎,100%强度超声3s停3s,超声5分钟(期间不时晃匀),至菌液清亮为止。
RIPA裂解,加入磷酸酶抑制剂NaVO3,取RIPA裂解液40μL,加入10μL5×蛋白上样缓冲液,煮沸l0min制各样品;进行WesternBlot验证,孵育一抗Anti-phosphotyrisinerabbitpAb过夜,4℃,室温孵育抗兔二抗1h后进行曝光,成像仪成像,观察结果;筛选细胞凋亡磷酸化信号通路相关蛋白;①将2.0mL洗膜缓冲液TBST加入要使用的4孔多碟的...