1、磷酸缓冲液(PBS,1L):8g NaCl,0.2g KCl,0.24g KH2PO4,3.628g Na2HPO4·12H2O,双蒸水定容至1L; 2、饱和氯化钠溶液(5M NaCl,1L):292.5g NaCl,双蒸水溶解定容至1L; 3、1M Tris-HCl缓冲液(pH 8.0):30.3g Tris base溶于200ml双蒸水中,盐酸调节pH值至8.0,定容至250ml; 4、0.5M EDTA(PH 8.0):36...
工作液可直接于细胞染色。 3. 用 1×PBS 充分清洗细胞 2~3 次。 4. 用 0.5 mL 染色工作液悬浮细胞,控制细胞密度为 1-5×105/mL。 注: 推荐准备两管额外的细胞样品, 每管只加入一种染料(Calcein AM 和 EthD-I),用于流式单染的补偿调节;另准备一管 仅含缓冲液(该缓冲液与配制 Calcein AM 及 EthD...
(PBS缓冲液)润洗一次;加入1ml胰酶,放入37℃消化;消化1min左右,在显微镜下观察细胞消化情况;消化完全后,加3ml完全培养基终止;将细胞悬液移入15ml离心管中离心,1000rpm/min(约200g)离心3-5min;吸去多余的液体,向细胞沉淀中加入适量的冻存液,轻轻吸打混匀;按比例分装至冻存管中;贴好标签后放入梯度冻存盒中;...
6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 实验材料与试剂配制: 1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。 2. 缓冲液使用:加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中,如果样品量不够或者不确定,缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。 混匀,静置1小时备用(如果标本是血清或者...
对于六孔板的一个孔,吸除培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1mL细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。 加入1mL JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育20分钟。 在孵育期间,按照每1mL JC-1染色缓冲液(5×)加入4mL蒸馏水的比例,配制适量的JC-1染色缓冲液(...
【材料和试剂】1)无菌生理缓冲液(PBS);2)胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中,保存于–20℃,使用前放在37℃水槽回温;3)新鲜培养基;4)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】1)预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内...
将细胞在刺激3小时以后沉淀,并将每个样品再悬浮于80μl/孔的facs缓冲液(pbs,10%fbs,0.1%叠氮化钠)中以建立混合液,每个样品包括2μlfc阻滞剂和0.5μg/ml的每种目标抗体。将样品在4℃温育20min,然后洗涤并重新悬浮在200μl/孔facs缓冲液中。为了固定细胞,将200μl1%低聚甲醛加入每个孔,并将平板在暗处在4℃...
加二抗:玻片置于 PBS (pH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5 min.切 片稍甩干后在圈内滴加组化试剂盒内与一抗相应种属 的二抗(HRP 标记)覆盖组织,室温孵育 50 min.DAB 显色:玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 5 min.切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的 DAB 显色液,显微镜下...
建议将抑制剂先以DMSO做梯度稀释,再将经过稀释的抑制剂加入缓冲液或细胞培养基。有些抑制剂甚至只有在其工作浓度下才能溶于水相。 比如细胞实验中希望终浓度为 1 μM 的话,可以把 10 mM 的 DMSO 母液用 DMSO 稀释到 1 mM,再吸 2 μL 加入到 2 mL 的生理盐水/PBS/细胞培液,终浓度即为 1 μM。为...
建议将抑制剂先以DMSO做梯度稀释,再将经过稀释的抑制剂加入缓冲液或细胞培养基。有些抑制剂甚至只有在其工作浓度下才能溶于水相。 比如细胞实验中希望终浓度为 1 μM 的话,可以把 10 mM 的 DMSO 母液用 DMSO 稀释到 1 mM,再吸 2 μL 加入到 2 mL 的生理盐水/PBS/细胞培液,终浓度即为 1 μM。为...