传代比例根据传代前细胞密度和数量而定,若细胞并未完全长 满,而判断过夜后会长过满,此时传代比例可以稍低,过细胞密度过大则传代比例也适当加 大。正常细胞接种到新瓶中的数量约为 4-5×10^5个。细胞传代的密度还需自行判断。若细胞 增殖 4-5 天仍未长满则说明传代密度过低。正常情况下 2-3 天传代为比较合...
传代:参照上述“传代”方法。 冻存:参照下述“hUMSC细胞冻存”。 hUMSC细胞传代培养(非原代): 在显微镜下观察细胞,当细胞融合度达到90%,即可传代。 弃去培养上清,加入DPBS溶液清洗1次,加入细胞消化液(推荐使用间充质干细胞消化液,RC200108)使其完全覆盖培养器皿底部。 室温孵育1-2分钟,轻轻拍打培养器皿,显微镜下...
细胞汇合度 90%-100%时进行细胞传代。 细胞密度切不可过低,也不可过大,意思是不能让细胞增殖到出现层叠现象。细胞密度或汇合度用 4 倍10倍物镜观察。 二、传代准备。 1、培养基、DPBS、胰蛋白酶进行室温复温 30 分钟以上,使液体温度尽量接近 室温。 2、耗材放置到方便操作的...
间充质干细胞的传代 间充质干细胞的传代 一、实验目的 1、掌握大鼠骨髓间充质干细胞原代培养的方法。2、熟练掌握间充质干细胞的传代、冻存和复苏 的操作过程。3、掌握间充质干细胞表面抗原的鉴定方法。4、通过诱导间充质干细胞成脂、成骨分化，鉴 定间充质干细胞的多向分化潜能，并掌握其诱导分化的方法。二...
传代培养:传代时先全部吸出培养液后,用无Ca2+ 、Mg2+PBS液洗涤二次,加入37℃预热的0.25%(2.5g/L,0.25%)胰蛋白酶(含1mmol/L EDTA,即用1mmol/L-EDTA-Na2配制)消化1~2分钟,吸去胰酶,以残留的胰酶继续消化,倒置显微镜下观察,细胞开始皱缩时(细胞开始变圆)加入完全培养液(3ml左右)终止胰酶作用。吸管反复吹打...
4.加入2mL浓度为0.05%的胰酶,轻轻晃动,使胰酶溶液均匀覆盖培养瓶底面。显微镜下,当70-80%的细胞变圆时轻拍培养瓶,并立即加入10mL人间充质干细胞无血清完全培养基进行中和。轻轻吸取瓶内液体反复冲洗瓶底,使细胞完全脱落; 注意: 1)吹打时动作要轻,避免损伤细胞; ...
脐带间充质干细胞通常按原代培养密度1:3的比例进行传代培养。传代培养至第3代,即可获得相当数量的UCMC。免疫细胞存储通过消化和传代培养细胞,可以淘汰非间充质干细胞,因此,传代培养的过程就是纯化间充质干细胞的过程。然而,长期在体外传代培养的UCMSC是否会衰老、突变等一直是人们关注的问题,也是影响细胞质量的深层次...
准备工作 (1)试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗(青链霉素)、75%酒精、95%酒精、培养瓶(50ml,260ml)。 (2)BALB/C小鼠(4~5周龄,18 ...
细胞:HUMSC细胞 中文名称:人脐带间充质干细胞 生长特性:贴壁细胞 HUMSC细胞培养基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清) 冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO 细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作) 1. 吸出原培养瓶中的培养基,PBS 缓冲液润洗细胞两次,加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意...
间充质干细胞(MSCs)作为一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型,在组织工程和再生医学领域具有广泛的应用价值。在MSCs的培养和传代过程中,消化酶的使用是不可或缺的关键步骤,胰酶是最常用的消化酶。胰酶浓度的选择直接影响到细胞的消化效果、活性以及后续实验的成败。然而,在实际操作中,操作人员往往忽视了胰酶...