mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定
Skp2-siRNA 重组腺病毒载体构建及鉴定 魏 刚 1,2 ,孙泽群2 ,孔霞3 ,黄永章3 ,王斌2 ,唐俊明3 ,徐少勇 2* (1武汉大学第二临床学院,湖北武汉 430072;湖北医药学院附属人民医院2消化内科;3临床医学研究所,湖北十堰 442000)[摘要]目的:构建针对Skp2的s i R N A 腺病毒载体。方法:合成针对Skp2的si RNA ...
目的:构建siRNA重组腺病毒载体,为研究Calponin.1基因在分娩发动中的作用机制提供 实验基础。方法:采用消化酶法对足月妊娠人子宫平滑肌细胞原代培养,并用免疫细胞化学方法进行鉴 定。构建腺病毒siRNA—Calponin一1质粒转染原代培养的子宫平滑肌细胞,采用RT.PCR和Western印迹检 ...
待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组伪狂犬病毒介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。 体外实验结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNANeg及接毒对照组相比,3个siRNA重组伪狂犬病毒均能抑制HP-PRRSV HN1株及PRRSV H1株的复制,其中PRV gG-/siRNAN2抑...
siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用。方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载 体pSES—HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy一1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES—HUS—MKsiRNA,在 HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒。用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细...
将合成的siRNA与处理好的载体进行连接反应。 连接反应条件需严格控制以提高成功率。 转化宿主菌是获取重组质粒的重要环节。筛选阳性克隆有助于得到正确重组质粒。 鉴定环节首先采用酶切鉴定重组质粒。 通过酶切图谱判断质粒构建是否成功。 测序鉴定可精准确认重组质粒的序列。 测序结果与预期序列比对能评估构建质量。 对前...
小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
本发明公开了一种载有siRNA的重组去铁蛋白纳米笼及其制备方法,所述纳米笼包括重组去铁蛋白纳米笼和包载于重组去铁蛋白纳米笼内的siRNA分子;所述重组去铁蛋白纳米笼表面修饰有寡聚赖氨酸。本发明以具有溶酶体逃逸功能的重组去铁蛋白纳米笼为载体,采用pH改变的解聚/重组法包载siRNA,所制得的纳米粒尺寸均一,具有主动...
Shuttle中,获得siRNA重组表达载体pShuttle-VP1。用限制性内切酶PI—SceI和I-CeuI双酶切siRNA重组表达载体和腺病 毒质粒载体pAdeno—X,利用体外连接法获得了重组质粒。经过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,证明成功构建了重组腺病毒 质粒pAdeno—VP1。利用脂质体转染法,将PacI线性化的重组腺病毒质粒pAdeno-VPl转染HEK293...
载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重 组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。 关键词:FoxO1;siRNA;腺病毒载体;HepG2细胞 中图法分类号:R394-33;R394.2;R735.7文献标识码:A ...